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原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面

1.細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。

４.基因在染色體上的定位。

5.檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳

使用分支DNA信號擴增的RNA FISH

Invitrogen? ViewRNA?和PrimeFlow?檢測是使用分支DNA信號擴增 (bDNA) 來檢測特異性信號的直接熒光RNA ISH方法。 使用獨立但兼容的信號擴增系統(tǒng)讓RNA靶標(biāo)的多重復(fù)用成為可能。 熒光RNA原位雜交檢測分為四個主要步驟：樣本制備、靶標(biāo)雜交、信號擴增以及檢測。 該方法可實現(xiàn)更高的特異性，更低的背景值和更高的信噪比。

雜交技術(shù)zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應(yīng)溫度。若反應(yīng)溫度低于Tm 10～15℃，堿基順序高度同源的互補鏈可形成穩(wěn)定的雙鏈，錯配對減少。若反應(yīng)溫度再低（Tm-30℃），雖然互補鏈之間也可形成穩(wěn)定的雙鏈，但互補堿基配對減少，錯配對增多、氫鍵結(jié)合的更弱。如兩個同源性在50%左右或更低些的DNA，調(diào)整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍，因此在實驗前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗，即zui適復(fù)性溫度、苛刻復(fù)性溫度及非苛刻復(fù)性溫度。溫度的選擇及溫度對雜交的影響見表18-3。

zui適復(fù)性溫度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻復(fù)性溫度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻復(fù)性溫度：Tns =Tm – (30或35℃)