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原位雜交技術(shù)基本原理

原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。

為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物。

原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，bai它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織或細胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標(biāo)記物可分為同位素標(biāo)記探針和非同位素標(biāo)記探針兩大類。常用的同位素標(biāo)記物有3H、35S、125I和32P，非同位素標(biāo)記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術(shù)可在原位檢測細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達，有很高的敏感性和特異性，已成為細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

雜交流程

雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復(fù)性動力學(xué)和熱穩(wěn)定性。雜交液的基礎(chǔ)成分為：Denhardt’s溶液（Ficoll，BSA，PVP），異源核酸（如鯡精3子DNA/tRNA/競爭DNA），磷酸鈉，EDTA，SDS，鹽離子，甲酰胺和硫酸葡聚糖，以及雜交探針。不同的應(yīng)用中進行雜交溫度、pH、鹽離子、甲酰胺、探針濃度等條件的優(yōu)化。常用的pH范圍為6.5~7.5，較高的pH值有助于提高雜交的嚴(yán)謹(jǐn)性。