武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)
原位雜交是指；分子雜交的一種形式。由未經(jīng)抽提分離的染色體DNA，在原來(lái)位置上被變性成單鏈后，與探針進(jìn)行分子雜交。1977年由本頓(W.D.Benton)和戴維斯(R.W.Davis)在原分子雜交基礎(chǔ)上發(fā)展的一種較新的分子雜交技術(shù)。方法是將菌落或噬菌斑轉(zhuǎn)移到硝9酸纖維素濾膜上，使在原位發(fā)生溶菌后變性的DNA，同濾膜原位結(jié)合，再與有放5射性同位素標(biāo)記的特定核苷酸“探針”雜交，其結(jié)果可用放5射自顯影來(lái)顯示，出現(xiàn)銀粒的地方便是待測(cè)染色體DNA上與探針互補(bǔ)順序所在的位置。對(duì)快速檢測(cè)轉(zhuǎn)化群落中的DNA序列或任何一種插入的DNA序列，以及動(dòng)植物的基因定位工作，都具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養(yǎng)技術(shù)”)

間接標(biāo)記的方法中應(yīng)用了報(bào)告分子標(biāo)記的探針，報(bào)告分子通過(guò)親和酶促的方法進(jìn)行顯色。常用的報(bào)告分子如地高6辛，生物素。結(jié)合地高6辛抗6體或鏈霉親和素上耦聯(lián)的酶系統(tǒng)進(jìn)行間接的底物反應(yīng)檢測(cè)。地高6辛標(biāo)記核酸的歷史可追溯到1987年，由于地高6辛是洋地黃的花和葉中特有的成分，檢測(cè)時(shí)使用的地高6辛抗6體不會(huì)結(jié)合于其他的生物分子。這是相較于生物素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)。地高6辛抗6體上可耦聯(lián)堿性磷酸酶、過(guò)氧化酶，及熒光分子和膠體金等，根據(jù)不同的應(yīng)用需求，呈現(xiàn)高信噪比的核酸檢測(cè)結(jié)果。但需注意，由于引入了免6疫檢測(cè)反應(yīng)，在放大檢測(cè)靈敏度的同時(shí)，應(yīng)注意樣品內(nèi)源性酶的滅活，以降低檢測(cè)背景。

通過(guò)不同標(biāo)記方法的聯(lián)合應(yīng)用，還可在同一樣本中實(shí)現(xiàn)染色體不同區(qū)域或細(xì)胞樣本中不同RNA序列的多重檢測(cè)。

另一種多聚體促進(jìn)劑是聚丙0烯0酸，用其鈉鹽，濃度為2%～4%。與硫酸葡聚糖相比，其優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格低廉，粘度低（MW=90 000）。小分子化學(xué)試劑酚和Guandine thiocyanate也能促進(jìn)雜交，它們可能是通過(guò)增加水的疏水性和降低雙鏈和單鏈DNA間的能量差異而發(fā)揮作用。酚作為雜交促進(jìn)劑，只能在低DNA濃度的液相雜交中觀察到，該方法曾被稱為酚乳化復(fù)性技術(shù)，該法不能用于固相雜交，因酚可引起核酸與膜的非特異吸附作用，即使在液相雜交中的應(yīng)用也是有限的。而Guandine thiocyanate可通過(guò)降低雙鏈DNA的Tm值而起作用。此外，該分子還可以促進(jìn)RNA的雜交，有裂解細(xì)胞而抑制RNase的作用。總之，硫酸葡聚糖和聚乙二醇因能用于固相雜交是目前zui常用的雜交促進(jìn)劑。