武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

SSC=150mMNaCl,15mM檸檬酸鈉溶液(pH7.4)

HCl處理：對(duì)樣本進(jìn)行20-30min的200mMHCl處理，可將蛋白抽提，并將核酸序列進(jìn)行一定程度的水解，增加雜交檢測(cè)的信噪比。

去垢劑處理：如果對(duì)樣品的固定、脫水、包埋等預(yù)處理過(guò)程不足以將脂膜成分破壞暴露核酸，可對(duì)樣品進(jìn)行額外的蛋白去垢劑處理(如TritonX-100和SDS)。

蛋白酶處理：樣品中待雜交的核酸序列常與蛋白纏繞交聯(lián)在一起，樣品的固定步驟更是加劇了蛋白的交聯(lián)程度，因此預(yù)滲透是核酸雜交前的常規(guī)步驟，通常通過(guò)蛋白酶K的消化作用來(lái)完成。根據(jù)不同的文獻(xiàn)來(lái)源，蛋白酶K的工作濃度通常設(shè)為10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMCaCl2,pH7.4,酶濃度可根據(jù)具體樣品進(jìn)一步優(yōu)化)，對(duì)樣品進(jìn)行37°C7.5–30min的處理。染色體涂片或核片的蛋白酶K處理濃度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文獻(xiàn)指出，固定石蠟包埋的組織切片樣品，使用胃蛋白酶（500μg/ml，溶于200mMHCl）將得到較好的蛋白消化結(jié)果。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)展的目的，就是要通過(guò)對(duì)動(dòng)物本身生命現(xiàn)象的研究，進(jìn)而推用到人類(lèi)，探索人類(lèi)的生命奧秘，控制人類(lèi)的疾病和衰老，延長(zhǎng)人類(lèi)的壽命。隨著醫(yī)學(xué)生物科學(xué)的突飛猛進(jìn)發(fā)展，認(rèn)識(shí)到公害問(wèn)題不僅已成為糧食、人口、老年人等的重大社會(huì)問(wèn)題，而且還涉及到地球上生活著的動(dòng)物生存問(wèn)題，例如產(chǎn)業(yè)公害、食品公害、藥品毒性等，均直接影響人體健康，對(duì)這些問(wèn)題的研究，必然要通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(包括動(dòng)物疾病模型的開(kāi)發(fā)等)來(lái)闡明解決。因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，特別是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的重要性愈來(lái)愈被人們所認(rèn)識(shí)，它已被認(rèn)為是人類(lèi)追求幸福生活的支柱，故實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)亦被稱(chēng)之為生命科學(xué);為此，先進(jìn)國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的發(fā)展，均給給予高度的重視，其投入的經(jīng)濟(jì)物資和技術(shù)力量，幾乎可同發(fā)展原子能科學(xué)相提并論，其重要意義可想而知。

肝纖維化動(dòng)物模型法：

180～200g Wistar或SD大鼠，皮射40%-50%CCl4，油溶液(0.3ml/100g)，每周2次，第2周 始，隔日以20％-30％酒精lml灌胃(或作為飲料)，飼以單純玉米面(混以0.5％膽固醇)，共10周。

評(píng)價(jià)：第2周出現(xiàn)小葉中心小片狀肝細(xì)胞變性壞死， 第4周開(kāi)始有較薄的纖維間隔形成，第6周間隔進(jìn)一步增厚，有假小葉形成：第8周形成厚的纖維間隔，分割形成假小葉。大鼠成活率60%-80%。

該模型是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型，可靠且時(shí)間短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于過(guò)程的動(dòng)態(tài)研究。