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原位雜交技術(shù)應(yīng)用于染色體、細(xì)胞和組織切片等樣品中進(jìn)行核酸特異性檢測，與免6疫組化技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓?fù)湫畔⒔Y(jié)合起來。1969年P(guān)ardue和Gall將放9射性標(biāo)記的探針直接應(yīng)用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克6隆技術(shù)的發(fā)展，及不同探針標(biāo)記系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)的應(yīng)用，大大增加了原位雜交檢測的應(yīng)用靈活性和檢測靈敏度。

間接標(biāo)記的方法中應(yīng)用了報告分子標(biāo)記的探針，報告分子通過親和酶促的方法進(jìn)行顯色。常用的報告分子如地高6辛，生物素。結(jié)合地高6辛抗6體或鏈霉親和素上耦聯(lián)的酶系統(tǒng)進(jìn)行間接的底物反應(yīng)檢測。地高6辛標(biāo)記核酸的歷史可追溯到1987年，由于地高6辛是洋地黃的花和葉中特有的成分，檢測時使用的地高6辛抗6體不會結(jié)合于其他的生物分子。這是相較于生物素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢。地高6辛抗6體上可耦聯(lián)堿性磷酸酶、過氧化酶，及熒光分子和膠體金等，根據(jù)不同的應(yīng)用需求，呈現(xiàn)高信噪比的核酸檢測結(jié)果。但需注意，由于引入了免6疫檢測反應(yīng)，在放大檢測靈敏度的同時，應(yīng)注意樣品內(nèi)源性酶的滅活，以降低檢測背景。

通過不同標(biāo)記方法的聯(lián)合應(yīng)用，還可在同一樣本中實現(xiàn)染色體不同區(qū)域或細(xì)胞樣本中不同RNA序列的多重檢測。

原位雜交中探針的選擇

DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記。寡核苷酸探針的長度較短，因此避免了探針內(nèi)部退火的問題，在雜交時的滲透能力也更好，探針與靶標(biāo)的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時需要控制探針片段長度，通常300-1000bp左右，能覆蓋到較長片段的靶核酸序列，增加檢測的靈敏度。