武漢思特進科技發(fā)展有限公司
主營產(chǎn)品: 檢測
浙江原位雜交制作-安徽原位雜交電話-江蘇原位雜交
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原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面
1.細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。
2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。
3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。
4.基因在染色體上的定位。
5.檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。
6.分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳
就DNA探針和RNA探針的比較,DNA探針在雜交過程中會出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用,將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。
Tips:RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性,其檢測特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴增的方法,可以更方便地進行RNA探針的制備;RNA探針合成后,還需驗證其對目標(biāo)片段檢測的靈敏度和特異性。
總的來說,隨探針濃度增加,雜交率也增加。另外,在較窄的范圍內(nèi),隨探針濃度增加,敏感性增加。依我們的經(jīng)驗,要獲得較滿意的敏感性,膜雜交中32P標(biāo)記探針與非放0射性標(biāo)記探針的用量分別為5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位雜交中,無論應(yīng)用何種標(biāo)記探針,其用量均為0.5~5.0μg/ml。探針的任何內(nèi)在物理特性均不影響其使用濃度,但受不同類型標(biāo)記物的固相支持物的非特異結(jié)合特性的影響。