多巴胺ELISA試劑盒

通用名稱：多巴胺ELISA試劑盒
英文名稱：dopamine ELISA
產(chǎn)品規(guī)格：96T

預(yù)期用途
多巴胺ELISA試劑盒可用于人血漿和尿液中多巴胺的體外定量檢測，可手動(dòng)操作，也可自動(dòng)操作。進(jìn)一步的研究表明：此試劑盒還可用于組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的研究。

前言簡介
兒茶酚胺類激素腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴胺主要由腎上腺髓質(zhì)、交感和大腦產(chǎn)生。它們幾乎影響所有的組織，并與其它激素和一起參與各種生理過程的調(diào)節(jié)。在許多疾病中，兒茶酚胺激素及其代謝產(chǎn)物間甲腎上腺素和去甲變腎上腺素的分泌量都會(huì)增加，因而這些激素可的診斷。所以，這些激素的檢測對(duì)于疾病的診斷及的具有重要意義。它主要用于嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷，當(dāng)然也用于成神經(jīng)細(xì)胞瘤和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤的診斷。
因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)一開始時(shí)有提取步驟，所以用戶可使用所有動(dòng)物材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。此試劑盒可檢測大鼠、小鼠或其它動(dòng)物，所有動(dòng)物的兒茶酚胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)相同。

檢測原理
此固相酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)利用的是ELISA的夾心法。微孔中包被了羊抗兔抗體。在溫育時(shí)間之內(nèi)，加入的抗體可直接與抗原分子上的一個(gè)表位結(jié)合。樣品中的抗原與酶標(biāo)二抗（可與抗原分子上的不同表位結(jié)合）在包被孔中溫育。加入底物液后，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品中抗原的量成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定。

貯存與穩(wěn)定性
試劑盒和運(yùn)輸環(huán)境和儲(chǔ)存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。

檢測步驟

1）在一次性試管內(nèi)，用釋放緩沖液以1:51的比例稀釋提取的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和尿液樣本（如：10ul提取樣本+500ul的釋放緩沖液）

2）在包被板的每一微孔中加入75μL剛配置好的COMT酶溶液，輕輕振蕩。

3）將預(yù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和尿液樣本加100ul至相應(yīng)孔內(nèi)血漿樣本直接加100ul于相應(yīng)孔內(nèi)在此步驟中，將槍頭直接觸碰COMT酶溶液，顏色會(huì)轉(zhuǎn)為粉紅色，輕輕混勻。

4）每孔中加入50μL多巴胺抗血清。

5）蓋板。在振蕩器（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育120min。

6）棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。

7）每孔加入100μL酶聯(lián)物。

8）蓋板。在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育60min。

9）棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。

10）加底物液和終止液時(shí)，其時(shí)間間隔應(yīng)相同。

11）每孔加入200μL底物液。

12）在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育40min。如果自動(dòng)操作時(shí)的溫度超過25℃時(shí)，則應(yīng)相應(yīng)的將溫育時(shí)間縮短至30min。

13）每孔加入50μL PNPP終止液以終止底物反應(yīng)，輕輕振蕩包被板以充分混合試劑成分。

14）加終止液后60min之內(nèi)405nm處讀取OD值。（參考波長：620-650nm）

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