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原位雜交涉及的步驟：玻片的準備和樣品固定，細胞或組織的預(yù)滲透處理，靶DNA變性（DNA原位雜交），探針制備，原位雜交過程，雜交后洗滌，探針（顯色）檢測。

玻片的準備和樣品固定

對于染色體涂片，1：1的乙醇/醚處理的載玻片已能符合要求。對于組織切片的原位雜交，為了在實驗過程中不丟失組織樣品，可使用多聚賴氨酸或鉻礬明膠包被的載玻片。

樣品的固定步驟是為了保持樣品的原有形態(tài)學(xué)。樣品固定是原位雜交中的步驟，從化學(xué)反應(yīng)角度來看，固定劑的使用和選擇對后續(xù)雜交的影響不會太大，因為核酸雜交的功能分子基團被安全地包裹在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，而交聯(lián)劑的使用對RNA基本沒有影響。對于染色體涂片，常使用/固定；石蠟包埋的組織切片用固定。冷凍切片可通過在4%的甲醛溶液中固定30min，或使用Bouin固定劑。

SSC=150mMNaCl,15mM檸檬酸鈉溶液(pH7.4)

HCl處理：對樣本進行20-30min的200mMHCl處理，可將蛋白抽提，并將核酸序列進行一定程度的水解，增加雜交檢測的信噪比。

去垢劑處理：如果對樣品的固定、脫水、包埋等預(yù)處理過程不足以將脂膜成分破壞暴露核酸，可對樣品進行額外的蛋白去垢劑處理(如TritonX-100和SDS)。

蛋白酶處理：樣品中待雜交的核酸序列常與蛋白纏繞交聯(lián)在一起，樣品的固定步驟更是加劇了蛋白的交聯(lián)程度，因此預(yù)滲透是核酸雜交前的常規(guī)步驟，通常通過蛋白酶K的消化作用來完成。根據(jù)不同的文獻來源，蛋白酶K的工作濃度通常設(shè)為10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMCaCl2,pH7.4,酶濃度可根據(jù)具體樣品進一步優(yōu)化)，對樣品進行37°C7.5–30min的處理。染色體涂片或核片的蛋白酶K處理濃度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文獻指出，固定石蠟包埋的組織切片樣品，使用胃蛋白酶（500μg/ml，溶于200mMHCl）將得到較好的蛋白消化結(jié)果。

肝纖維化動物模型

模型概述：

1. 任何可引起肝損傷的因素長期、反復(fù)作用于，均可產(chǎn)生肝細胞變性、壞死，繼而肝和纖維組織，導(dǎo)致肝纖維化。

2. 已有化學(xué)性損傷、性、生物學(xué)、酒精性和營養(yǎng)性肝纖維化模型。每種方法因致病因素不同，給藥途徑不同，產(chǎn)生的機理、纖維化出現(xiàn)早晚、穩(wěn)定性、出現(xiàn)率、重復(fù)性及機體自然患病過程相似程度等都不盡相同。