武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營：動植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

原位雜交試驗(yàn)

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí)，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時(shí)后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后換成甲9醇，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng)，可阻斷色素的形成)

多種探針標(biāo)記檢測系統(tǒng)

基于地高3辛、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標(biāo)記檢測常為直接探針標(biāo)記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進(jìn)行核酸標(biāo)記。由于標(biāo)記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗(yàn)，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。

使用分支DNA信號擴(kuò)增的RNA FISH

Invitrogen? ViewRNA?和PrimeFlow?檢測是使用分支DNA信號擴(kuò)增 (bDNA) 來檢測特異性信號的直接熒光RNA ISH方法。 使用獨(dú)立但兼容的信號擴(kuò)增系統(tǒng)讓RNA靶標(biāo)的多重復(fù)用成為可能。 熒光RNA原位雜交檢測分為四個(gè)主要步驟：樣本制備、靶標(biāo)雜交、信號擴(kuò)增以及檢測。 該方法可實(shí)現(xiàn)更高的特異性，更低的背景值和更高的信噪比。