武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

原位雜交試驗(yàn)

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí)，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時(shí)后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后換成甲9醇，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng)，可阻斷色素的形成)

原位雜交是指；分子雜交的一種形式。由未經(jīng)抽提分離的染色體DNA，在原來(lái)位置上被變性成單鏈后，與探針進(jìn)行分子雜交。1977年由本頓(W.D.Benton)和戴維斯(R.W.Davis)在原分子雜交基礎(chǔ)上發(fā)展的一種較新的分子雜交技術(shù)。方法是將菌落或噬菌斑轉(zhuǎn)移到硝9酸纖維素濾膜上，使在原位發(fā)生溶菌后變性的DNA，同濾膜原位結(jié)合，再與有放5射性同位素標(biāo)記的特定核苷酸“探針”雜交，其結(jié)果可用放5射自顯影來(lái)顯示，出現(xiàn)銀粒的地方便是待測(cè)染色體DNA上與探針互補(bǔ)順序所在的位置。對(duì)快速檢測(cè)轉(zhuǎn)化群落中的DNA序列或任何一種插入的DNA序列，以及動(dòng)植物的基因定位工作，都具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養(yǎng)技術(shù)”)




原位雜交技術(shù)應(yīng)用于染色體、細(xì)胞和組織切片等樣品中進(jìn)行核酸特異性檢測(cè)，與免6疫組化技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓?fù)湫畔⒔Y(jié)合起來(lái)。1969年P(guān)ardue和Gall將放9射性標(biāo)記的探針直接應(yīng)用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克6隆技術(shù)的發(fā)展，及不同探針標(biāo)記系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用，大大增加了原位雜交檢測(cè)的應(yīng)用靈活性和檢測(cè)靈敏度。