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磷酸烯醇式丙-酮酸羧化酶（PEPC）測試盒測定意義

測定意義

PEPC（EC 4.1.1.31）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應(yīng)生成草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶，對三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要調(diào)節(jié)作用。

測定原理

PEPC催化磷酸烯醇式丙-酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-，蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm測定NADH減少速率，計(jì)算PEPC活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

提取液：液體×1瓶，4℃保存。 
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。 
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.6mL試劑一，充分震蕩溶解。 
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.6mL試劑一，充分震蕩溶解。 
操作步驟：
一、粗酶液提?。?span lang="EN-US">
1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清液待測。
2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3.血清等液體：直接測定。
二、測定操作： 
1.分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。 
2.試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30min。 
3.空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸餾水、800 μL試劑一、50μL試劑二和50 μL試劑三，迅速混勻，于412nm處測定3min內(nèi)吸光值變化，第10s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2。△A空白管=A2－A1 
4.測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液、800 μL試劑一、50μL試劑二和50 μL試劑三，，迅速混勻，于412nm處測定3min內(nèi)吸光值變化，第10s吸光值記為A3，第190s吸光值記為A4。△A測定管=A4-A3 

磷酸烯醇式丙-酮酸羧化酶（PEPC）測試盒產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：
1、快速簡便：雙試劑，96孔板直接操作，快速、簡便。
2、取樣量微：需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高：檢測線0.5U/ml，是羥胺法5倍，鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好：批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%，試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.2%。
6、回收試驗(yàn)： X =102.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。且特異性強(qiáng)，不受類SOD物質(zhì)的干擾
8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等，效果均佳。

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）測試盒產(chǎn)品售后有保障、品質(zhì)無憂    高保障    品質(zhì)現(xiàn)貨

1.嚴(yán)格的質(zhì)量控制：嚴(yán)格檢測每一批產(chǎn)品，確保產(chǎn)品穩(wěn)定性，靈敏度。
2.專業(yè)的產(chǎn)品包裝：適應(yīng)產(chǎn)品特性的包裝，確保運(yùn)輸?shù)陌踩院痛鎯Φ挠行?span lang="EN-US">
3.秉持“客戶購買我們的產(chǎn)品就是收獲一份價(jià)值，一份安心的信念，竭誠提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，售后服務(wù)無優(yōu)