深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
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主營(yíng)產(chǎn)品: 德國(guó)IBL中國(guó)代理, 臨床診斷試劑, 傳染病系列檢測(cè)試劑, 科研試劑, 抗體, 腫瘤系列檢測(cè)試劑, 食物不耐受檢測(cè)試劑, 不孕不育檢測(cè)試劑, 兒茶酚胺與神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè), 激素類檢測(cè)試劑, 糖尿病類檢測(cè)試劑, 日本IBL, 德國(guó)DRG, 美國(guó)Cortez, 美國(guó)InBios, 美國(guó)Fuller, 比利時(shí)Coris等多家國(guó)際著名診斷產(chǎn)品公司的中國(guó)代理商
流·感-A檢測(cè)試劑ELISA
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流 感A IgG檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:流 感A IgG檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱:Influenza A IgG ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】96T
【預(yù)期用途】
試劑盒可用于人血清和血漿中流 感A IgG的定性和定量檢測(cè)。
【前言簡(jiǎn)介】
流行性感 冒是呼 吸道的一種急性發(fā)熱病毒感染。這種感染大多由飛沫傳染所致,并成為一種流行病。這一病毒以及它的毒素可導(dǎo)致支氣 管黏膜出現(xiàn)嚴(yán)重的炎 癥,也可使支 氣 管受到損害。1到3天的潛伏期后,感染癥 狀就會(huì)突然出現(xiàn):之后會(huì)出現(xiàn)體溫急劇升高,常常還伴隨有顫 抖,出現(xiàn)鼻黏膜炎的主要癥 狀,還會(huì)出現(xiàn)令人疼 痛的干 咳,氣管 炎,喉 炎和常發(fā)性的鼻 炎與結(jié)膜 炎。流 感病毒可組成一主要形態(tài)學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)特性相似的病毒群體。我們將流 感病毒分A、B和C三大類,其中也包括很多其它的變種。根據(jù)其核蛋白和基質(zhì)蛋白的不同抗原性,我們可以區(qū)別流 感病毒的不同類型。但實(shí)際上起免疫作用的抗原是紅細(xì)胞凝集素和神經(jīng)氨酸苷酶。這兩種抗原都是表面抗原,都可表現(xiàn)為持久的抗原可變性,叫做轉(zhuǎn)換。因而會(huì)出現(xiàn)新的流行性感 冒,而且抗原的可變性可促進(jìn)它的流行性。流 感病毒類型(A、B和C)的確定給臨床醫(yī)生和流行病學(xué)家進(jìn)行進(jìn)一步診斷提供了重要指示。因而我們知道了流 感病毒B可導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床病程,也可使其病毒流行擴(kuò)散。同樣的,在流 感病毒A的傳染中,流行病學(xué)的價(jià)值以及機(jī)體保護(hù)的檢測(cè)方法就變得很重要了。
【檢測(cè)原理】
此固相ELISA試劑盒利用的夾心法,包被板上包被了抗原。用對(duì)人IgG具有特異性的酶標(biāo)二抗來檢測(cè)結(jié)合到包被抗原上的樣品特異性抗體。底物反應(yīng)后,所顯示的顏色強(qiáng)度與檢測(cè)到的IgG特異性抗體的量成正比。樣品的結(jié)果可直接使用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。
【主要組成成分】
4×2ml | 標(biāo)準(zhǔn)品A-D | 1;10;50;150U/mL,待用 標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控 標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控 標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽性質(zhì)控 標(biāo)準(zhǔn)品D=陽性質(zhì)控 內(nèi)含抗流 感A的IgG抗體,PBS(磷酸緩沖液),穩(wěn)定劑。 |
1×15ml | 酶聯(lián)物 | 紅色,待用。內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的抗人IgG,蛋白緩沖液,穩(wěn)定劑。 |
1×12×8 | 微孔板 | 可拆,包被有特異性抗原。 |
1×15ml | 底物液 | 含TMB |
1×15ml | 終止液 | 0.5MH2SO4 |
1×60ml | 稀釋液 | 含PBS緩沖液,BSA,<0.1%NaN3 |
1×60ml | 濃縮洗滌液 | 濃縮型(10×),含PBS緩沖液,吐溫20 |
2× | 封板紙 | 用于在溫育時(shí)遮蓋微孔板 |
1× | 自封袋 | 用于儲(chǔ)存不用的板條 |
所需材料(未提供)
1) 移液器,體積:5;50;100;500 μL
2) 校準(zhǔn)儀
3) 樣品稀釋用試管(1ml)
4) 帶試劑儲(chǔ)器8道移液器
5) 洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
6) 能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
7) 雙蒸水或去離子水
8) 吸水紙,取樣吸頭和計(jì)時(shí)器
【儲(chǔ)存條件】
試劑盒必須貯存于2-8℃的環(huán)境中,避免高溫或太陽直射。樣品和試劑的貯存和穩(wěn)定性將在相關(guān)章節(jié)闡述。開封包被板在有效期內(nèi)穩(wěn)定,但在2-8℃環(huán)境下貯存時(shí)請(qǐng)把包裝袋密封好。
【樣本要求】
血清,血漿(EDTA,肝素)
按照一般原則進(jìn)行靜 脈采血。自樣品采集到檢測(cè)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)完整性。不要使用易容血、黃 疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁,實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將其離心以除去顆粒物質(zhì)。 | |||
貯存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | 避免高溫和太陽直射,避免反復(fù)凍融 |
穩(wěn)定性 | 2天 | >2天 |
【檢測(cè)方法】
成分準(zhǔn)備
稀釋/溶解 | 成分 | | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 穩(wěn)定性 |
20ml | 洗滌液 | 200ml | 雙蒸水 | 1:11 | 加熱至37°C以溶解結(jié)晶,充分混合 | 2-8°C | 8周 |
樣品稀釋
樣品 | 稀釋 | 稀釋液 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 常規(guī)方法 | 稀釋緩沖液 | 1:101 | 例:5μL+500μL稀釋緩沖液 |
樣品中IgG濃度高于*標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步稀釋。
檢測(cè)步驟
1) 加100μL標(biāo)準(zhǔn)品和已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中,在定性檢測(cè)中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。
2) 封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。
3) 移去封板紙,棄去孔中液體。用300μL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。
4) 在每一微孔中加入100μL酶聯(lián)物。
5) 封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘
6) 移去封板紙,棄去孔中液體。用300μL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí),如果有條件的話,可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生
7) 每孔加TMB底物液100μL。
8) 室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。
9) 在每一微孔中加入100μLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí),顏色藍(lán)色變成黃色。
10) 加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)OD值。
【結(jié)果計(jì)算】
質(zhì)量控制
嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟的實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化管理規(guī)定或其他的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。按照質(zhì)控單的要求,所有的標(biāo)準(zhǔn)品濃度都必須在一個(gè)可以接受的范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求,那么實(shí)驗(yàn)則無效,必須重做。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)使用已知濃度的樣品做進(jìn)一步的有效質(zhì)控。如果實(shí)驗(yàn)背離實(shí)際結(jié)果,應(yīng)檢查以下問題:試劑有效期,貯存條件,取樣器,實(shí)驗(yàn)設(shè)備,溫育時(shí)間,清洗方法。
定性評(píng)估
臨界值是直接從標(biāo)準(zhǔn)品B中得出。臨界指標(biāo)(COI)是由樣本的平均OD值和臨界質(zhì)控的平均OD值計(jì)算得出來的。如果樣本的平均OD值在臨界值±20%內(nèi),則該樣本應(yīng)判定為可疑樣本;OD值高于臨界值則為陽性,反之為陰性
定量評(píng)估
在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或自動(dòng)計(jì)算的方法,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值(Y軸,線性)對(duì)其濃度(X軸,對(duì)數(shù))做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用三次回歸、四參數(shù)或雙對(duì)數(shù)曲線方程可以得到更好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在推算標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),應(yīng)當(dāng)充分利用好每一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)值(明顯逸出的數(shù)值應(yīng)當(dāng)被忽略,再使用更加合理的數(shù)值代替它)。樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接讀取。從坐標(biāo)紙上讀取結(jié)果時(shí)應(yīng)當(dāng)把起始的稀釋倍數(shù)考慮進(jìn)去。將稀釋了的樣品結(jié)果乘以稀釋因子即可得到其相應(yīng)的結(jié)果。樣品中抗體濃度高于*標(biāo)準(zhǔn)品的樣品,應(yīng)當(dāng)按實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備說明所述的方法進(jìn)行稀釋,并重新檢測(cè)。
結(jié)果判定
方法 | U/ml | 說明 |
定量 (標(biāo)準(zhǔn)曲線) | <8 | 陰性 |
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