描述：本試劑能夠在15分鐘內(nèi)對(duì)液體樣品中的蛋白進(jìn)行提取濃縮，或脫鹽、脫去垢劑、脫還原劑等。適用于各種液體樣品(10μL～1L)，如蛋白溶液、胞漿胞核 蛋白提取液、細(xì)胞或微生物培養(yǎng)基上清液、血液、尿液、腦脊液等各種體液；也適于從細(xì)胞懸液提取總蛋白。蛋白回收率95-100%，遠(yuǎn)高于經(jīng)典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除樣品中的脂質(zhì)，不影響后續(xù)SDS-PAGE和Western Blot等生物實(shí)驗(yàn)?？捎?.5ml離心管微量提取也可大規(guī)模制備，簡(jiǎn)便高效。

規(guī)格：100次

儲(chǔ)存： 4℃保存  12個(gè)月有效

操作步驟：

微量提取加樣量及比例              液體蛋白樣品 (ml)      10      100      150

提取試劑 (ml)          50      500      750

H₂O (ml)               30      300      450

1.         每100ml液體蛋白樣品，按比例加5倍體積(500ml) 提取試劑，振蕩混勻，室溫靜置3分鐘。蛋白濃度較高時(shí)，會(huì)很快發(fā)生凝集導(dǎo)致溶液混濁。

2.         10,000g 4℃離心3分鐘。蛋白濃度較高時(shí)可省略此步驟。

3.         打開(kāi)管口，加入3倍體積(300 ml)的純水，振蕩混勻。

4.         10,000g 4℃離心3分鐘。溶液分為兩相。蛋白在兩相中間，濃度高時(shí)會(huì)形成薄膜狀或沉淀于管底；濃度低時(shí)則肉眼難以看到。

5.         小心吸取上層相，棄去。注意應(yīng)該保留一定量的上層相，以免吸走中間相的蛋白膜。

6.         加入500 ml 無(wú)水乙醇，振蕩洗滌沉淀。10,000g 4℃離心2分鐘。棄上清，再次瞬時(shí)離心數(shù)秒并吸去管內(nèi)液體。勿觸動(dòng)管底的蛋白沉淀(量少時(shí)沉淀不可見(jiàn))。

7.         敞開(kāi)管口，空氣自然干燥。

8.         根據(jù)樣品蛋白初始濃度，加適量雙蒸水或上樣緩沖液，95℃煮5分鐘溶解蛋白沉淀。

注意

1.       可室溫操作。1 mg/ml總蛋白可被有效沉淀，更低濃度的蛋白可加入白蛋白做載體幫助沉淀。可有效去除液體樣品中的鹽(1M)、還原劑(1%巰基乙醇或DTT)、去垢劑(5%SDS、1% Triton X-100、1% NP-40、油脂等。如果上述成分濃度過(guò)高，用水稀釋后進(jìn)行提取。干燥蛋白沉淀可4℃或－20℃長(zhǎng)期保存。

2.       血漿蛋白或疏水蛋白溶解較慢，反復(fù)數(shù)次95℃煮并加以－20℃凍融可助溶。必要時(shí)4℃溶解過(guò)夜，或用2% SDS溶解沉淀，95℃煮，然后離心去除不溶解物。

3.       如定量蛋白應(yīng)使用不含溴酚藍(lán)的凝膠上樣緩沖液溶解沉淀，蛋白定量后再加入溴酚藍(lán)。

4.       提取培養(yǎng)細(xì)胞總蛋白：用蒸餾水或1% SDS制備一定體積的細(xì)胞懸液，振蕩裂解細(xì)胞，然后執(zhí)行上述液體樣品蛋白提取程序。

5.       實(shí)體組織的蛋白提取可使用P1250實(shí)體組織和細(xì)胞蛋白抽提試劑盒。

6.       提取試劑有刺激性，一旦接觸立即用水清洗。