普利萊 液體樣本谷胱甘肽還原酶檢測 試劑盒 貨號(hào): E2003
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普利萊-液體樣本谷胱甘肽還原酶檢測-試劑盒-貨號(hào)-

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品牌 普利萊
產(chǎn)品品牌 APPLYGEN
產(chǎn)品名稱 普利萊 液體樣本谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒
英文名稱 無
貨號(hào) E2003
產(chǎn)品規(guī)格 100次
用途 科研實(shí)驗(yàn)專用
儲(chǔ)存 具體根據(jù)說明書操作
儲(chǔ)存周期 根據(jù)說明書具體操作
供貨能力 現(xiàn)貨
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普利萊 液體樣本谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒 貨號(hào): E2003


貨號(hào)

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價(jià)格（元）

E2003

液體樣本谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒

100次

360

 



描述：液體樣本谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒（Glutathione Reductase Assay Kit）是一種靈敏簡單的利用比色法檢測谷胱甘肽還原酶（GR）活性的試劑盒。谷胱甘肽包括還原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）。GSH 是細(xì)胞中巰基的主要來源，對于維護(hù)蛋白巰基適當(dāng)?shù)难趸€原狀態(tài)有重要作用。GR廣泛分布在各種組織細(xì)胞和體液中，可以還原GSSG生成GSH，維持細(xì)胞內(nèi)或體液中充足的GSH。本試劑盒以GSH以TNB標(biāo)準(zhǔn)品和反應(yīng)時(shí)間定量GR酶活性。檢測線性范圍為4.7-150mU/ml，靈敏度≤4.7mU/ml。

規(guī)格：100次

儲(chǔ)存： 按說明書要求保存  12個(gè)月有效 

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備

血漿樣品或紅細(xì)胞裂解液的準(zhǔn)備：取新鮮抗凝血至少0.5ml，4℃,1000g離心5分鐘，上清為血漿。對于沉淀中紅細(xì)胞，利用冰冷PBS洗滌3次。取約5倍紅細(xì)胞體積的冰冷的純水，重懸細(xì)胞沉淀，冰浴10分鐘。4℃，10000g離心10分鐘。取上清進(jìn)行蛋白濃度定量后用于谷胱甘肽還原酶的測定。不立即測定的樣品可以-70℃保存。如果樣品中谷胱甘肽還原酶活性超出測定范圍，可利用樣品稀釋液適當(dāng)稀釋后測定，稀釋倍數(shù)請通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備

2.1 GSSG儲(chǔ)備液的配制：在本試劑盒提供的12mg GSSG中加入1ml的純水，溶解并混勻即為GSSG儲(chǔ)備液，濃度為10mM。

2.2 DTNB儲(chǔ)備液的配制：在本試劑盒提供的4mg DTNB中加入1ml本試劑盒提供的DMSO溶解并混勻，即為DTNB儲(chǔ)備液，濃度為10mM。

2.3 NADPH儲(chǔ)備液的配制：在本試劑盒提供的5mg NADPH中加入1ml純水，溶解并混勻，即為NADPH儲(chǔ)備液，濃度為5mg/ml。

2.4 谷胱甘肽還原酶檢測工作液的配制：根據(jù)待測樣品數(shù)配制適當(dāng)量的總谷胱甘肽檢測工作液，表中試劑按比例混合后即為谷胱甘肽還原酶檢測工作液。

2.5 NADPH工作液的配制：取NADPH儲(chǔ)備液，利用谷胱甘肽還原酶檢測緩沖液稀釋10倍，配制為0.5mg/ml的NADPH工作液。每檢測一個(gè)樣品需要50μl的0.5mg/ml NADPH。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

將300μM的TNB溶液用谷胱甘肽還原酶檢測緩沖液稀釋成150、75、37.5、18.8、9.4 μM濃度的TNB溶液，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線測定。在本試劑盒相同反應(yīng)體系下TNB標(biāo)準(zhǔn)曲線只需要測定1次，后續(xù)測定只需利用該標(biāo)曲進(jìn)行酶反應(yīng)產(chǎn)物TNB生成量的計(jì)算。

4. 測定方法

4.1     TNB標(biāo)準(zhǔn)曲線測定：利用上述系列濃度TNB標(biāo)準(zhǔn)品，各取200μl到96孔板中，TNB各孔加入量分別為60、30、15、7.5、3.75、1.88、0nmol，測定A412nm。

4.2     使用96孔板，依次加入谷胱甘肽還原酶檢測工作液、樣品后，混勻，25℃或室溫孵育2分鐘。

4.3     各孔加入NADPH工作液50μl，25℃孵育20分鐘。

4.4 孔加入NADPH工作液50μl啟動(dòng)谷胱甘肽還原酶反應(yīng)后，立即開始計(jì)時(shí)，并在2.5、5、10、20分鐘等時(shí)間點(diǎn)測定A412nm。如果樣品吸光度升高過快，可適度稀釋樣品后測定；如果樣品吸光度升高過慢，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行樣品測定。

5. 數(shù)據(jù)處理

利用TNB標(biāo)準(zhǔn)品的量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并獲得橫縱坐標(biāo)之間的函數(shù)關(guān)系式，然后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和各樣品的吸光度值計(jì)算樣品中一定時(shí)間段(注：計(jì)算酶活性時(shí)間段最好采用5-15分鐘時(shí)間段，這樣可以避免樣品本身的顏色及樣品中較高濃度GSH和NADPH對反應(yīng)的干擾)內(nèi)產(chǎn)生的TNB量，從而換算為谷胱甘肽還原酶活力（注意精確計(jì)時(shí)）。由于有多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的測定，可以選擇時(shí)間線性良好的時(shí)間段計(jì)算谷胱甘肽還原酶活力。

谷胱甘肽還原酶定義：在25℃，pH 7.6條件下，每分鐘還原1.0μmol GSSG為GSH的谷胱甘肽還原酶為1 U，1 U=1000 mU。

計(jì)算公式：酶活力(mU)=TNB生成量（nmol）/2/反應(yīng)時(shí)間(min)。






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