描述：凋亡中晚期細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征是細(xì)胞核固縮，核內(nèi)染色質(zhì)在局部區(qū)域凝集，致密濃染，繼而核碎裂出現(xiàn)凋亡小體。普利萊公司的調(diào)亡細(xì)胞染色試劑盒以Hoechst染料為基礎(chǔ)，其獨(dú)特的添加成分和系統(tǒng)優(yōu)化條件使該試劑盒具有以下幾個(gè)卓越的特征：

(1). 適用于調(diào)亡細(xì)胞核及調(diào)亡小體的染色；

(2). 應(yīng)用范圍寬廣: 活體細(xì)胞和固定的貼壁或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，石蠟或冰凍組織切片；

(3). 快速，30分鐘完成細(xì)胞凋亡染色。

組成：可用于檢測(cè)100個(gè)樣品。

            1. 100×染色濃縮液 0.5ml；

            2. 抗熒光淬滅封片劑。

儲(chǔ)存：染色濃縮液需4℃避光保存，六個(gè)月內(nèi)有效。

自備試劑：固定液(4%多聚甲醛),  PBS 緩沖液或0.9%NaCl。

貼壁細(xì)胞染色操作說(shuō)明：以生長(zhǎng)在24孔板內(nèi)的貼壁細(xì)胞為例(或在蓋玻片上貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞）

1.       吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌兩次。

2.       加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間（可4℃過(guò)夜）。

3.       吸去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗滌一次，吸盡液體。

4.       取5ml 100X濃縮染液與0.5ml PBS緩沖液混合，加入到培養(yǎng)皿中, 室溫孵育10分鐘。

5.       吸去染液，PBS洗滌一次，吸去多余液體后用抗熒光淬滅封片劑封片。

懸浮細(xì)胞或消化后的細(xì)胞染色操作說(shuō)明：

1.       懸浮細(xì)胞或消化后的細(xì)胞，用PBS洗滌，1000g低速離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管。

2.       加入0.5ml固定液重懸細(xì)胞沉淀，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。

3.       1000g低速離心，吸去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗滌一次，離心，吸盡液體。

4.       將少量細(xì)胞懸液滴到載玻片上，涂布，風(fēng)干。

5.       取5ml 100X染色濃縮液與0.5ml PBS緩沖液混勻，用之重懸細(xì)胞。室溫孵育10分鐘。

6.       吸去染色液，用PBS洗滌一次，吸去多余液體后用抗熒光淬滅封片劑封片。

組織切片染色操作說(shuō)明

1.       常規(guī)包埋切片后，脫臘，透明。

2.       PBS或0.9%NaCl洗2次各3分鐘，吸盡液體。

3.       取5ml 100X染色濃縮液與0.5mlPBS緩沖液混勻。將染液滴加到玻片細(xì)胞處，室溫孵育10分鐘。

4.       吸去染色液，用PBS或0.9%NaCl洗滌一次。封片。

熒光顯微鏡觀察：

紫外激發(fā)波長(zhǎng) 350－370 nm, 藍(lán)色熒光發(fā)射波長(zhǎng)465 nm，正常細(xì)胞核和調(diào)亡小體均染成藍(lán)色，但凋亡小體或凋亡細(xì)胞核呈高亮度熒光，或核碎裂狀，易與正常胞核區(qū)分。