描述： 變性細(xì)胞裂解液 (Denaturing Lysis Buffer)用于組織、細(xì)胞變性裂解提取總蛋白，適宜于如下幾種情況：(1)抗原是不溶性蛋白，如不溶性的細(xì)胞骨架和膜蛋白或高度疏水蛋白；(2)抗原位點(diǎn)隱匿于蛋白高級折疊結(jié)構(gòu)之中；(3)易集聚沉淀的蛋白；(4)體外翻譯產(chǎn)生的蛋白。

規(guī)格： 50ml  500ml

儲存：4℃保存  12個(gè)月有效

操作步驟：

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1.         800g 4℃離心 5 分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 10⁶ cells=~20 μl, 10⁷ cells=~100 μl PCV）；每 50-100 μl PCV 加入 5 倍體積變性組織細(xì)胞裂解緩沖液（250-500 μl）,冰浴放置 10 分鐘，每隔 5 分鐘在漩渦混合儀上振蕩 30 秒；

2.         12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；

注意：如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先 95℃加熱 5 分鐘，迅速冰浴 5 分鐘，然后再進(jìn)行步驟 3

制備組織裂解產(chǎn)物：

1.         取 50-100 mg 組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的 PBS 洗滌 2 次離心棄去 PBS；

2.         加入 0.5-1 ml 預(yù)冷的變性組織細(xì)胞裂解緩沖液；

3.         4℃用玻璃勻漿器勻漿 20-40 次，直到 95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置 10 分鐘，并每隔5 分鐘在漩渦混合儀上振蕩 30 秒；

4.         12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

注意：如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先 95℃加熱 5 分鐘，迅速冰浴 5 分鐘，然后再進(jìn)行步驟 4

說明：

1.         在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2.         在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3.         在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇進(jìn)行添加。