描述：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶又稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶，英文名：Alanine aminotransferase（簡稱ALT）或Glutamate pyruvate transaminase（簡稱GPT）。主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，正常情況下，細(xì)胞內(nèi)濃度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝細(xì)胞被破壞，就可以使血清酶增高一倍。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標(biāo)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶還存在于心臟和骨骼肌中。本試劑盒可以檢測實(shí)體組織、培養(yǎng)細(xì)胞等生物樣品中的ALT活性。

原理： 試劑盒采用賴氏法進(jìn)行ALT活性檢測。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT/GPT）能催化丙氨酸與酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，后者在酸性條件下與顯色劑（2，4-二硝基苯肼）作用生成丙酮酸二硝基苯腙，其在堿性條件下呈棕紅色，顏色深淺可以反映酶活性高低。

適應(yīng)范圍： 本試劑盒可以檢測組織或培養(yǎng)細(xì)胞中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性。

組成： （105次）

儲存：以上組分按要求保存，6個(gè)月有效。

操作步驟：

一. 樣品準(zhǔn)備：

1、動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照100mg組織加入500ul-1000ul，4 ℃或冰浴預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液,使用玻璃勻漿器或電動(dòng)勻漿器等4 ℃或冰浴勻漿。隨后4 ℃ 12000rpm離心5min，取上清，部分進(jìn)行蛋白定量（普利萊BCA法蛋白定量試劑盒P1511）。

2、收集細(xì)胞，按照每10⁷個(gè)細(xì)胞加入500ul-1000ul，4 ℃或冰浴預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液,使用玻璃勻漿器或電動(dòng)勻漿器等4 ℃或冰浴勻漿。隨后4 ℃ 12000rpm離心5min，取上清，部分進(jìn)行蛋白定量（普利萊BCA法蛋白定量試劑盒P1511）。

二.酶活力測定：

1. 丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：按下表用底物緩沖液和PB緩沖液將丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0、1.1ug、2.2ug、3.3ug、4.4ug、5.5ug七個(gè)濃度，充分混勻。丙酮酸0濃度孔只加底物緩沖液和PB緩沖液，以此作為空白孔調(diào)零，按照下述操作步驟操作，而后在520nm處讀吸光度OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

使用分光光度計(jì)測定，丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋比例：

使用酶標(biāo)儀測定，丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋比例：

2. ALT活性測定：

   參照下表使用分光光度計(jì)進(jìn)行操作。

使用酶標(biāo)儀測定反應(yīng)體系：

三、ALT酶活力計(jì)算：

以丙酮酸微克數(shù)為x軸，測得的吸光度OD值為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本對應(yīng)的丙酮酸質(zhì)量，然后根據(jù)ALT酶活力單位計(jì)算公式，計(jì)算ALT酶活性，建議以蛋白濃度進(jìn)行校正。

分光光度計(jì)測定，ALT酶活力：

未稀釋樣本ALT酶活力 =（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×250/2.5

稀釋樣本ALT酶活力=（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×稀釋倍數(shù)×250/2.5

分光光度計(jì)測定時(shí)，ALT酶活力：

未稀釋樣本ALT酶活力 =（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×100/2.5

稀釋樣本ALT酶活力=（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×稀釋倍數(shù)×100/2.5

ALT酶活力單位定義：每毫升樣本在37℃與底物作用30min后，能產(chǎn)生2.5ug的丙酮酸為一個(gè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力單位。

說明：

1、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的正常參考值為0～40U。高于40U即稱為谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線上數(shù)值在20～100U是準(zhǔn)確可靠的，超過200 U 時(shí)，需將樣品稀釋。

3、溶血標(biāo)本不宜使用，因血細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶活力較高，會影響測定結(jié)果。