描述：超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD) 能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成過氧化氫和氧氣，是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶。在生物抗氧化機制中扮演重要角色。目前測定SOD活性常用方法有WST-1法和WST-8法，其中WST-8法比WST-1法更加穩(wěn)定、靈敏度更高。本試劑盒采用了目前測定SOD方法中穩(wěn)定性更好、靈敏度更高的的WST-8法。可以檢測細胞或組織勻漿液上清、血漿、紅細胞抽提物、血清等生物樣品中的SOD活性。一個試劑盒共可以進行100次檢測。

原理：WST-8可以和黃嘌呤氧化酶催化產(chǎn)生的超氧化物陰離子反應(yīng)產(chǎn)生水溶性的甲臜染料(formazan dye)，該反應(yīng)步驟可以被SOD所抑制。通過對WST-8產(chǎn)物的比色分析即可計算SOD酶活力。

適用范圍：血清、血漿、紅細胞抽提物等液體樣本

組成：（100次，50次減半）

1. SOD檢測緩沖液：       70 ml

2. WST-8：                800 ul

3. 酶溶液：               100ul

4. 反應(yīng)啟動液(40X):        60ul

儲存：-20℃避光保存，6個月有效。

操作步驟：

1. 樣品準備：  （以血漿樣本為例）

血漿樣品的準備：用抗凝管(肝素鈉或EDTA)收集血液，顛倒混勻。4 ℃ 600g 離心10分鐘，移取上清至另一新的1ml 離心管中，適量生理鹽水稀釋后即可作為血漿樣本進行檢測。

2. 試劑盒準備：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

 a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。

c. SOD酶活力的計算：

SOD酶活力的計算公式如下：

待測樣品中SOD酶活力單位＝檢測體系中SOD酶活力單位＝抑制百分率/ (1－抑制百分率) units

例如，當抑制百分率為50% 時，待測樣品中SOD酶活力單位＝50% / (1－50%)units＝1 unit；當抑制百分率為60% 時，待測樣品中SOD酶活力單位＝60% / (1－60%)units＝1.5 units。