普利萊 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 貨號(hào): P1202-50
普利萊 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 貨號(hào): P1202-50
普利萊 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 貨號(hào): P1202-50
普利萊 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 貨號(hào): P1202-50

普利萊-細(xì)胞核蛋白提取試劑盒-貨號(hào)-P1202-50

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品牌 普利萊
產(chǎn)品品牌 APPLYGEN
產(chǎn)品名稱 普利萊 細(xì)胞核 蛋白提取試劑盒
英文名稱 無(wú)
貨號(hào) P1202-50
產(chǎn)品規(guī)格 50次
用途 科研實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用
儲(chǔ)存 具體根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作
儲(chǔ)存周期 根據(jù)說(shuō)明書(shū)具體操作
供貨能力 現(xiàn)貨
商品介紹

普利萊 細(xì)胞核 蛋白提取試劑盒 貨號(hào): P1202-50



貨號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格目錄價(jià)（元）
P1202-50細(xì)胞核提取試劑盒50次380
P1202-100細(xì)胞核提取試劑盒100次660



描述：在破碎組織細(xì)胞時(shí)加入活化劑，幫助裂解細(xì)胞，反復(fù)振蕩或使用剪切力釋放細(xì)胞核，然后在溫和條
件下低速離心收集細(xì)胞核。在30-60分鐘內(nèi)完成，無(wú)需特殊設(shè)備，簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好。適用于從組織塊、
貼壁或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞制備完整高純度細(xì)胞核。制備的細(xì)胞核仍然保持其在細(xì)胞內(nèi)時(shí)所具有的形狀和大小，
是進(jìn)行細(xì)胞核相關(guān)實(shí)驗(yàn)、研究蛋白核轉(zhuǎn)位、DNA-蛋白相互作用、以及進(jìn)行WBt和免疫共沉淀的理想材料。

組成：100 ml Buffer 1（CER）, 5 ml Reagent A, 100 ml Buffer 2（NER）, for 100 preparations。

儲(chǔ)存：短期4 oC?？煞盅b出一部分?20 oC保存。

適用：從組織塊、貼壁或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞制備完整的細(xì)胞核。
Step-1A 培養(yǎng)細(xì)胞裂解
1. 貼壁細(xì)胞需消化或刮下細(xì)胞，懸浮細(xì)胞可直接離心，PBS 洗滌，800 × g 5 min 收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)，并估
計(jì)細(xì)胞沉淀的體積。每次提取需要1-2 ? 107 個(gè)細(xì)胞。通常每1 × 107 個(gè)細(xì)胞的沉淀體積約100 μl。
2. 加入10 倍于細(xì)胞沉淀體積的1 ml 冰預(yù)冷的Buffer 1（CER），振蕩重懸細(xì)胞。冰水浴5 分鐘。
3. 加入1/20 體積約50 μl Reagent A，劇烈振蕩混合。冰水浴5 分鐘。再次劇烈振蕩。
4. 將細(xì)胞裂解物3 次或多次通過(guò)22 號(hào)針頭剪切，或用小容積間隙緊密的玻璃勻漿器上下研磨20 次。在
相差顯微鏡下檢查游離的核應(yīng)達(dá)到95% 而未裂解細(xì)胞應(yīng)少于5%。否則繼續(xù)剪切或研磨。
Step 1-B 組織塊破碎和裂解
1. 稱取100-200 mg 新鮮組織如肝臟、腦，PBS 沖洗，加入1 ml（約10 倍組織體積）冰預(yù)冷的Buffer 1
（CER）。
2. 用間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)上下研磨組織10 次。冰水浴5 分鐘。
3. 加入1/20 體積約50 μl Reagent A，混合。冰水浴5 分鐘。劇烈振蕩。
4. 在相差顯微鏡下檢查游離的核應(yīng)達(dá)到95% 而未裂解細(xì)胞應(yīng)少于5%，否則繼續(xù)剪切或研磨。
5. 如有必要，用濾紙過(guò)濾組織勻漿裂解物。
Step 2 細(xì)胞核制備
1. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管。1000 × g 離心3 min 4 oC 沉淀細(xì)胞核，棄上清。
2. 用10 倍于胞核體積(~0.5 ml) Buffer 2( NER) 重懸核。2000 × g 離心10 min at 4 oC，棄上清。
3. 重復(fù)步驟2 洗滌細(xì)胞核。在相差顯微鏡下胞核應(yīng)游離分散在清亮背景下存在顆粒物質(zhì)表明細(xì)胞質(zhì)成分
殘留；核聚集表明存在粘連性的細(xì)胞骨架或染色質(zhì)，通常由于細(xì)胞勻漿破碎不足或起始細(xì)胞數(shù)太多。
4. 棄上清。用50-100 μl 適宜的緩沖液重懸細(xì)胞核，進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)?；?qū)顺恋碇苯? 70 oC 保存，
注意解凍后會(huì)有部分核在融化過(guò)程中破裂。
 
注意：
1. 破碎細(xì)胞是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁細(xì)胞較難破壁。組織細(xì)胞裂解物3 次或多
次通過(guò)22 號(hào)針頭剪切破碎細(xì)胞，或用小容積玻璃勻漿器、間隙緊密的研杵上下研磨培養(yǎng)20 次。用相
差顯微鏡檢查未裂解細(xì)胞應(yīng)少于5%。否則繼續(xù)剪切或研磨。
2. 基于梯度密度離心原理，以離心力g 計(jì)算正確的離心速度十分重要。
3. 加入何種緩沖液重懸細(xì)胞核，取決于用戶后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。如做WB 可用RIPA 裂解緩沖液。
4. 進(jìn)行Western Blot 和2D-膠電泳，可先用小體積的水重懸核沉淀，然后加入樣品緩沖液，如果直接用
含SDS 的緩沖液裂解核將釋放大量粘稠的DNA 使樣品難以分散。反復(fù)加熱變性有助于DNA 斷裂，
可通過(guò)細(xì)針頭反復(fù)抽吸打斷DNA。免疫沉淀時(shí)可直接加入IP 緩沖液。




普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

 

 

 

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公司名稱 北京普利萊基因技術(shù)有限公司
聯(lián)系賣(mài)家 劉總 （QQ：584291973）
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