普利萊 線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒（組織和細(xì)胞通用） 貨號: C1260-50

描述：線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于從組織或培養(yǎng)細(xì)胞中分離線粒體和細(xì)胞胞漿成分。加入分離溶液，勻漿破碎組織細(xì)胞，經(jīng)過數(shù)次800g和12000g離心，在60分鐘內(nèi)即可分離出完整的線粒體和胞漿成分。制備的線粒體具有很高的生物學(xué)活性，可進(jìn)行各種功能研究如酶學(xué)測定，更可用于Western Blot、2D-膠、線粒體蛋白或DNA提取、蛋白質(zhì)組學(xué)等研究。嚴(yán)格按照說明操作，總是能制備獲得高純度線粒體。一篇方法學(xué)研究論文發(fā)現(xiàn)，用普利萊試劑盒制備線粒體的得率、活性、純度優(yōu)于蔗糖密度梯度離心法和Invotrogen/Pierce線粒體提取試劑盒方法。

特點(diǎn)：

1、  操作簡單，可在一小時(shí)內(nèi)完成。

2、  實(shí)驗(yàn)室常規(guī)設(shè)備即可，無需超速離心。

3、  制備的線粒體具有高活性，可用于后續(xù)的各類實(shí)驗(yàn)分析。

4、 發(fā)表的SCI文章超過百篇。

規(guī)格：50次  100次

儲存： ?20°C   一年有效

操作步驟：（注意：以下所有操作均在4°C進(jìn)行）

1.         樣品處理：組織勻漿：取100~200 mg新鮮組織樣品，剪為0.5cm²的碎塊放入玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.5 mL冰預(yù)冷的Mito Solution。研磨組織20次。培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：800 g 5 min離心收集細(xì)胞。單次提取需2-5 × 10⁷個(gè)細(xì)胞。加入1.5 mL冰預(yù)冷Mito Solution重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)研磨細(xì)胞30次。

2.         將勻漿液轉(zhuǎn)移到離心管中，800 g ，4 oC離心5 min。

3.         取上清液。再次800 g ，4 oC 離心5 min。

4.         將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管。10,000 g ，4 oC離心10 min。線粒體沉淀在管底。離心后的上清含胞漿成分，可收集用于對照實(shí)驗(yàn)。

5.         洗滌線粒體：加入0.2 mL Mito Solution，輕彈管底重懸線粒體沉淀；12,000 g ，4 oC離心10 min。棄上清，線粒體沉淀在管底。

6.         重懸線粒體：可以用Mito Solution重懸線粒體沉淀，也可以用合適后續(xù)實(shí)驗(yàn)的自備緩沖液來裂解線粒體沉淀，具體用量是：約每100 mg組織提取的線粒體用50 μl，約每5 × 10⁷個(gè)細(xì)胞提取的線粒體用100 μl。用量請根據(jù)組織或細(xì)胞類型進(jìn)行微調(diào)。

7.         裂解線粒體后，進(jìn)行蛋白濃度測定。立即使用或?70 oC保存。

目前，使用我公司線粒體/胞漿蛋白制備試劑盒發(fā)表的SCI英文論文已有多百篇，以下供參考：

1、Shangguan W J, Li H, Zhang Y H. Induction of G2/M phase cell cycle arrest and apoptosis by ginsenoside Rf in human osteosarcoma MG 63 cells through the mitochondrial pathway[J]. Oncology reports, 2014, 31(1): 305-313.

2、Zhou X, Zhao Y, Fang Y, et al. Hes1 is upregulated by ischemic postconditioning and contributes to cardioprotection[J]. Cell biochemistry and function, 2014, 32(8): 730-736.

3、Zhang P, Pan H, Wang J, et al. Telomerase activity-independent function of telomerase reverse transcriptase is involved in acrylamide-induced neuron damage[J]. Biotechnic & Histochemistry, 2014, 89(5): 327-335.

4、Zhou X L, Wan L, Xu Q R, et al. Notch signaling activation contributes to cardioprotection provided by ischemic preconditioning and postconditioning[J]. J Transl Med, 2013, 11: 251.

5、Zhang F, Zhang L, Sun L, et al. Effects of Fluid Shear Stress on Expression of Smac/DIABLO in Human Umbilical Vein Endothelial Cells[J]. Current Therapeutic Research, 2013, 74: 36-40.

6、Zhao G, Ma H, Shen X, et al. Role of glycogen synthase kinase 3β in protective effect of propofol against hepatic ischemia–reperfusion injury[J]. Journal of Surgical Research, 2013, 185(1): 388-398.

7、Sun L L, Zhang L, Meng X L, et al. Effects of fluid shear stress on the expression of Omi/HtrA2 in human umbilical vein endothelial cells[J]. Molecular medicine reports, 2013, 7(1): 110-114.

8、Sun L Q, Zhao J, Zhang T T, et al. Protective effects of Salvianolic acid B on Schwann cells apoptosis induced by high glucose[J]. Neurochemical research, 2012, 37(5): 996-1010.

9、Zhou Q, Li Y, Jin J, et al. Lx2-32c, a novel taxane derivative, exerts anti-resistance activity by initiating intrinsic apoptosis pathway in vitro and inhibits the growth of resistant tumor in vivo[J]. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2012, 35(12): 2170-2179.

10、Li W, Zhang J, An W. The conserved CXXC motif of hepatic stimulator substance is essential for its role in mitochondrial protection in H 2 O 2-induced cell apoptosis[J]. FEBS letters, 2010, 584(18): 3929-3935.

11、Fang N X, Yao Y T, Shi C X, et al. Attenuation of ischemia–reperfusion injury by sevoflurane postconditioning involves protein kinase B and glycogen synthase kinase 3 beta activation in isolated rat hearts[J]. Molecular biology reports, 2010, 37(8): 3763-3769.

12、Zhao C Q, Zhang Y H, Jiang S D, et al. Both endoplasmic reticulum and mitochondria are involved in disc cell apoptosis and intervertebral disc degeneration in rats[J]. Age, 2010, 32(2): 161-177

13、Yin Q, Jin P, Liu X, et al. SDF-1α inhibits hypoxia and serum deprivation-induced apoptosis in mesenchymal stem cells through PI3K/Akt and ERK1/2 signaling pathways[J]. Molecular biology reports, 2011, 38(1): 9-16.

普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

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