普利萊 植物總蛋白提取試劑 貨號: P1258-50

描述：植物組織成分復雜含有較多的酚類物質、多糖、色素、次生代謝產物， 這使得植物蛋白質的分離提取變得困難。本試劑適用于多種植物根、莖、葉及果實等的新鮮或凍存組織，能夠快速有效地提取植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除組織中所含的多糖、脂質、次生代謝產物等干擾蛋白研究的成分，同時能夠使提取的蛋白質處于最佳的活性狀態(tài)和檢測狀態(tài)，適用于酶學活性測定，單向、雙向蛋白電泳、Western Blot 和免疫共沉淀等實驗。

規(guī)格： 50ml  100ml

儲存：4℃避光保存，12個月有效

操作步驟：

1.         組織勻漿，必須充分勻漿，這一步非常關鍵。

（1）凍存組織勻漿：預先將研缽至于-20℃或-70℃冰箱內預冷。取液氮凍存的植物組織，放入冰凍的研缽內研磨成粉末，注意使組織處于冰凍狀態(tài)，如組織顏色加深或變黑通常表明組織已經融化。將研磨好的組織轉移到新管，按每 200mg 植物組織加 0.5ml 比例加入提取試劑，混勻后冰上放置20 分鐘，期間可數(shù)次顛倒混勻，以便蛋白溶解。

（2）新鮮組織勻漿：取新鮮組織放入研缽中，按每 200mg 植物組織加 0.5ml 比例加入提取試劑，充分研磨至勻漿液中看不到大的塊狀或者片狀組織，保證組織研磨破碎。轉移至離心管內，冰上放置20 分鐘。

2.         離心：12000g 離心 15 分鐘，將上清液轉移至新的離心管中，直接使用或-70 ℃儲存。

3.         后續(xù)處理：

（1）如果進行酶學測定，直接取蛋白上清液加入反應。

（2）沉淀蛋白；首先估計制備的蛋白上清液體積。方法一：加 1/3體積 30%三氯醋酸水溶液；方法二：加入 6-10倍體積的 1:1混合的丙酮/乙醇，然后-20℃沉淀 1 小時或過夜。4 ℃，5000g 離心 10分鐘，棄上清，空氣略干沉淀，用適量的 1*SDS 上樣緩沖液溶解沉淀，95℃變性 5 分鐘，上樣電泳。適于進行 SDS-PAGE、Western Blot、雙向電泳等。

（3）直接電泳：需加入 4*SDS 上樣緩沖液。上清如有少量色素一般不會影響蛋白電泳。

（4）免疫共沉淀：用蒸餾水等比例稀釋提取的蛋白上清，進行免疫共沉淀。

（5）蛋白定量：用 BCA 蛋白定量試劑盒進行定量（產品貨號 P1511）.

以下列舉部分使用普利萊植物蛋白提取試劑發(fā)表的SCI文章，供參考。

1、  Wang F X, Ma Y P, Yang C L, et al. Proteomic analysis of the sea‐island cotton roots infected by wilt pathogen Verticillium dahliae[J]. Proteomics, 2011, 11(22):

2、  4296-4309. Yuan H, Meng D, Gu Z, et al. A novel gene, MdSSK1, as a component of the SCF complex rather than MdSBP1 can mediate the ubiquitination of S-RNase in apple[J]. Journal of experimental botany, 2014: eru164.

3、  Yu X, Jones H D, Ma Y, et al. (E)-β-Farnesene synthase genes affect aphid (Myzus persicae) infestation in tobacco (Nicotiana tabacum)[J]. Functional & integrative genomics, 2012, 12(1): 207-213.

4、  Wang F X, Ma Y P, Yang C L, et al. Proteomic analysis of the sea‐island cotton roots infected by wilt pathogen Verticillium dahliae[J]. Proteomics, 2011, 11(22): 4296-4309.

5、  Gao S, Yu B, Yuan L, et al. Production of transgenic sweetpotato plants resistant to stem nematodes using oryzacystatin-I gene[J]. Scientia Horticulturae, 2011, 128(4): 408-414.

普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

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