普利萊 RIPA裂解液（帶PMSF) 貨號(hào): C1055

描述：RIPA裂解液對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分有較強(qiáng)裂解作用，是常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用RIPA 裂解液加強(qiáng)型特別適于western blot和大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的實(shí)驗(yàn)等。PMSF能抑制蛋白酶對(duì)蛋白的降解。

規(guī)格：100ml

儲(chǔ)存：RIPA裂解液  4℃保存      PMSF粉末 （100mM） -20℃保存 

PMSF溶液l  -20℃保存    以上組分12個(gè)月有效

操作步驟：

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物（預(yù)先將PMSF溶劑加入PMSF粉末中混勻，按1:99比例加入RIPA裂解液中）

1.      800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 10⁶ cells=~20 ml, 10⁷ cells =~100 ml PCV）；

2.      每50-100 ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250-500 ml）,冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

3.      12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；

4.      假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

制備組織裂解產(chǎn)物（預(yù)先將PMSF溶劑加入PMSF粉末中混勻，按1:99比例加入RIPA裂解液中）

1.      取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2.      加入 0.5-1 ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液；

3.      4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

4.      12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

5.      假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

6.      20％的甘油保存于 -70^oC 或-20^oC。

注意：

1.         在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2.         在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3.         PMSF溶液易降解，請(qǐng)于-20^oC保存，按比例現(xiàn)用現(xiàn)加。

普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

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