植物RNA提取試劑盒（適用含高多糖多酚植物組織）      R1050

        

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	價格
R1050-50	植物RNA提取試劑盒(適用含高多糖多酚植物組織)	50次	550元
R1050-100	植物RNA提取試劑盒(適用含高多糖多酚植物組織)	100次	900元

描述：一些植物組織富含多糖、多酚、次級代謝產(chǎn)物，在細胞裂解后可與RNA緊密結(jié)合形成難溶的膠凍狀沉淀導(dǎo)致提取失敗，明顯抑制下游RNA反應(yīng)如逆轉(zhuǎn)錄和PCR等。植物RNA提取試劑盒組提供了卓越的植物RNA分離方案。首先，Lysis Solution采用復(fù)合型強變性劑和裂解劑能夠裂解堅硬的植物組織，并完全抑制RNA酶活性；同時，Lysis Solution獨特的內(nèi)在成分既能抑制多酚氧化，又能最大限度地結(jié)合植物多糖和多酚以及次生代謝產(chǎn)物。其次，強烈的有機抽提步驟可進一步滅活RNA酶，去除蛋白質(zhì)和基因組DNA污染，并進一步去除植物多糖和多酚以及次生代謝產(chǎn)物。隨后，任何殘留的多糖和多酚可進一步被Plant RNA Aid結(jié)合，并通過離心去除。RNA提取可在60分鐘內(nèi)完成，所提取的RNA純度極高，完全不含DNA和多糖污染，可用于構(gòu)建cDNA文庫、RT-PCR、Northern轉(zhuǎn)印分析、Poly(A) mRNA純化、體外翻譯、和RNA酶保護實驗。由于動物肝臟和肌肉等組織富含糖原，此植物RNA提取試劑盒也特別適用從動物肝臟或肌肉組織提取高純度的總RNA。

 

組成：

(1) Lysis Solution: 50 ml，用于植物組織裂解、分離RNA、去除植物多糖和多酚；

(2) Extraction Reagent: 50 ml，用于有機抽提去除蛋白質(zhì)、DNA、多糖和多酚；

(3) Plant RNA Aid:      5 ml，用于完全去除植物多糖多酚和次生代謝產(chǎn)物。

 

適用范圍：各種植物組織如葉片、根莖、種子組織。富含多糖糖原的動物肝臟肌肉組織。每0.5 ml Plant RNA Reagent可裂解50~150 mg植物組織，或5 ′ 10⁶個植物培養(yǎng)細胞。

 

儲存條件: 4 ^oC密封避光保存1年有效

 

用戶實驗用品和操作準備：

極微量RNA酶都會導(dǎo)致RNA降解。分離RNA時RNA酶污染主要來自以下五個方面：(1) 實驗人員的雙手。(2) 器皿、吸頭離心管、自備液體。(3) 組織細胞破碎不可避免地釋放內(nèi)源RNA酶。(4) RNA未能完全與蛋白質(zhì)分離。(5) RNA沉淀和溶解后來自吸頭離心管和溶液。Lysis Solution可完全抑制RNA酶活性，Extraction Reagent滅活并在離心步驟完全清除RNA酶。二者的結(jié)合使得RNA酶不再成為問題。因此使用高壓消毒20分鐘的吸頭離心管和溶液即可勝任RNA提取操作。然而在RNA溶解之后，來自實驗材料的RNA酶污染將會導(dǎo)致RNA降解，應(yīng)嚴格使用高壓滅活RNA酶的用品。戴手套無疑是有益的，但戴口罩和帽子則無必要。只要嚴格按照本指南準備和操作，使用Plant RNA Kit總是能獲得高純度RNA。

 

1.          固體組織破碎設(shè)備?？捎孟铝醒b置之一：1)玻璃勻漿器。泡酸清潔，用高壓滅菌蒸餾水洗滌數(shù)次。2)研缽。適用于液氮凍存組織的研磨，清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機械勻漿器(Polytron，Tekmar或類似產(chǎn)品)，打開開關(guān)，在蒸餾水中清洗分散器頭數(shù)次。

2.          高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管。RNA沉淀溶解之后，應(yīng)嚴格使用高壓消毒的一次性用品。然而Plant RNAtrip能在RNA酶污染環(huán)境下工作，在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管，但僅推薦在緊急情況下這樣做。

3.          普通雙蒸水，高壓消毒20分鐘。用于沖洗器皿，配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液。DEPC處理的雙蒸水。加DEPC到水中至終濃度為0.01% v/v，室溫過夜，高壓消毒30分鐘。用于溶解RNA，配制TE緩沖液和75％乙醇。

4.          濕冰。在冰上進行操作有助于減少RNA降解。

5.          其它用品。電泳槽，雙蒸水沖洗。離心機和加樣器，無需處理。

6.          戴手套。注意某些實驗如提取質(zhì)粒DNA使用大量RNA酶，為防污染，須全面仔細清洗實驗器具和實驗區(qū)域。

 

RNA提取程序：

1.        植物組織細胞破碎裂解

冰上操作。立即并快速破碎組織至關(guān)重要。初始組織細胞過量不僅使RNA得率下降，還將導(dǎo)致DNA和蛋白質(zhì)污染。

1．1植物組織破碎與裂解

確定組織用量：推薦按比例每50~150 mg新鮮植物組織加0.5 ml Lysis Solution，但植物組織用量的上限變化甚大。(1)某些新鮮植物組織含水量甚高，而較干燥的植物組織50mg可能已經(jīng)接近上限。為獲足量RNA必須測試加入每種組織的量。注意使用過量的組織將導(dǎo)致提取失敗。(2) 軟組織、葉片、花、多汁組織、發(fā)芽種子等可直接加入Lysis Solution研磨破碎，而堅硬的植物組織如種子、木質(zhì)莖干等最好先在液氮中研磨破碎為粉末。

按比例每50-150 mg植物組織加0.5 ml Lysis Solution，按下列方法之一裂解組織。(1) 研缽：適用于液氮凍存組織。將液氮凍存組織研成粉末，加0.5 ml Lysis Solution，繼續(xù)研磨組織至完全破碎也可轉(zhuǎn)移到玻璃勻漿器繼續(xù)研磨。(2) 玻璃勻漿器：放入剪碎的新鮮植物組織，加入0.5 ml Lysis Solution，放置冰上，上下手動勻漿組織10-20次。(3) 內(nèi)切式高速機械勻漿器：將植物組織放入塑料或玻璃試管內(nèi)，試管置冰浴燒杯中，加入0.5 ml Lysis Solution，將內(nèi)切式分散器頭插入管內(nèi)溶液中間并與組織塊接觸，轉(zhuǎn)速12,000-20,000 rpm，緩慢上下移動試管10-20次，直到大部分組織打散。注意：少量難以打碎的組織碎片不影響后續(xù)RNA提取。用研缽和玻璃勻漿器勻漿組織時應(yīng)略微多加一些裂解液，以補充裂解產(chǎn)物粘在器皿壁上造成的體積丟失。破碎組織用玻璃勻漿器可能比液氮研磨方便。

1．2植物培養(yǎng)細胞的破碎與裂解

棄培養(yǎng)基，收集細胞。每1-5 ′ 10⁶個細胞加0.5 ml Lysis Solution，須有效地覆蓋瓶皿的細胞表面?；蝿踊蛴梦^吹打使提取液流過并裂解所有細胞。置冰上10分鐘，傾斜瓶皿使粘稠的裂解物聚于一處以便取出。

 

2         將裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到1.5 ml離心管，置冰上20-30分鐘。注意：富含多糖 和多酚的植物組織可延長孵育時間至30-60分鐘。

 

3         12,000 ′ g 4 ^oC 離心10分鐘。取上清液轉(zhuǎn)移到新管。注意：組織纖維碎片、植物多糖和多酚等沉淀在管底。大部分基因組DNA也在管底形成疏松粘稠的團狀物。取上清液時如吸入少量拉絲狀DNA粘稠物，不影響后續(xù)實驗。