DAPI染色液   B1061

描述：DAPI(4,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸 鹽，4，6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚)， CAS: 28718-90-3，分子式: C16H15N5，分子量:277.324。英文名:4,6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride。DAPI 為一種能夠與 DNA 中大部分 A，T 堿基相互結(jié)合的熒光染料，可以穿透完整的細(xì)胞 膜，與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標(biāo)記的作用，可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光，和EB相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍，是非常優(yōu)秀的DNA染料。熒光顯微鏡下可以看到細(xì)胞核呈顯藍(lán)色熒光，細(xì)胞標(biāo)記的效率高(幾乎為100 %) 。DAPI常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，DAPI染色也常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。細(xì)胞經(jīng)熱激處理后用DAPI染色3分鐘，在熒光顯微鏡下可以看到細(xì)胞核的形態(tài)變化（a. 正常的細(xì)胞核: 核形完整，染色質(zhì)均勻。b. 染色質(zhì)固縮，向外周聚集，形成周邊化。c. 染色質(zhì)進(jìn)一步固縮，形成很多顆粒物質(zhì)。d. 細(xì)胞核破裂形成碎片，核解體。）。DAPI的最大激發(fā)波長為340nm,最大發(fā)射波長為488nm； 當(dāng)DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長為360nm，最大發(fā)射波長為460nm。 DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色，且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red 染劑（紅色熒光染劑）的發(fā)射波長僅有少部分重疊，可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧１井a(chǎn)品為DAPI PBS溶液，純度≥90%，為即用型工作液，可以直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

適用范圍： DAPI 染色液可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。

儲(chǔ)存:  -20℃避光可長期儲(chǔ)存，2-8℃可保存6個(gè)月。

操作步驟（僅供參考）

1. 固定細(xì)胞或組織切片： 經(jīng)過固定后，適當(dāng)洗滌除去固定劑。如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，可先進(jìn)行免疫熒光染色，染完畢后再進(jìn)行 DAPI 染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。

2. 貼壁細(xì)胞： 加入少量 DAPI 染色液，覆蓋住樣品即可。吸除 DAPI 染色液，用 TBST、PBS 或生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。

3. 懸浮細(xì)胞： 至少 加入待染色樣品體積3倍的色液，混勻。 室溫染色 5-10 分鐘。

4. 移植的細(xì)胞： 在細(xì)胞移植前，將DAPI 以一定的濃度加入培養(yǎng)基中，與細(xì)胞共同孵育過夜，用PBS 緩沖液漂洗至少6 次以洗掉未結(jié)合的DAPI，再用酶消化后離心收集細(xì)胞，加入DMEM 培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液以備用。

5. 置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長 360-400nm。

說明

1. DAPI 被認(rèn)為具有致癌性，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免交叉污染。

2. 本產(chǎn)品需避光，并盡量避免反復(fù)凍融。

3. 熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑?？篃晒馑p封片劑可向本公司訂購

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。