一氧化氮檢測試劑盒    E1030    

 

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	價(jià)格（元）
E1030	一氧化氮NO檢測試劑盒（NitricOxideAssayKit）	500次	410

描述：一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一種重要的氣體信號(hào)分子和效應(yīng)分子，可以作為第二信使參與許多生物效應(yīng)和生理病理過程。體內(nèi)NO含量低，半衰期短，且易被氧化。Griess反應(yīng)一直是最經(jīng)典的生物樣品NO測定方法，反應(yīng)產(chǎn)物的光密度OD值與NO濃度呈線性關(guān)系。本試劑盒基于Griess 反應(yīng)原理，采用優(yōu)化的反應(yīng)條件和比色法測量液體樣品NO的濃度。方法簡單，線性范圍2.5~800μM。按照每150 μl反應(yīng)體系含50 μl樣品推算，相當(dāng)于樣品的檢測靈敏度約為300 pmol/50 μl。

參考文獻(xiàn)：

1.     Bredt, D.S. and Snyder, S.H. (1994) Nitric oxide: a physiologic molecule. Ann. Rev. Biochem. 63, 175

2.     Griess, P. (1879) Chem. Ber. 12, 426.

 

適用：液體生物樣品如血液、尿、培養(yǎng)基中NO的檢測。

 

組成：(500次)

1.    NaNO2標(biāo)準(zhǔn)品      0.5 ml (100 mmol/L)

2.    Griess R1               25 ml

3.    Griess R2               25 ml

 

儲(chǔ)存：4oC避光保存6個(gè)月有效

 

所需設(shè)備：96孔酶標(biāo)板，可見光分光光度計(jì)，最佳波長540nm，也可選用490-550 nm進(jìn)行測定，但靈敏度略降。

 

準(zhǔn)備步驟：

測定前取出試劑升溫到室溫。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：每次測量均新做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用與樣品相似的液體稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

A.    取100 mmol/L NaNO2標(biāo)準(zhǔn)品8μl，加到992μl蒸餾水中，得到1000μl之800 μM管。

B.    從800 μM管取200μl加入200μl蒸餾水得400μM管，然后依次取樣用蒸餾水倍比稀釋，得到200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57 μM管。最后設(shè)置不加標(biāo)準(zhǔn)品的0濃度管。

C.    從以上各管各取50 μl 加入酶標(biāo)板。

D.    等待后續(xù)加入樣品，以及加入Griess試劑后，一起反應(yīng)并測量。

 

樣品測量：

1.     取50 μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，加入96孔板中。

2.     每孔加入50 μl Griess R1

3.     優(yōu)化步驟：室溫避光放置5分鐘。此步驟可進(jìn)一步提高靈敏度。但NO濃度較高時(shí)可省略。

4.     每孔加入50 μl Griess R2。

5.     室溫避光放置5分鐘。

6.     540 nm (490-550 nm均可)測定吸光度。應(yīng)在30 min內(nèi)測完，以免退色降低靈敏度。

7.     制備標(biāo)準(zhǔn)曲線：以吸光度OD值為x軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為y軸，用Excel做圖并得到標(biāo)準(zhǔn)曲線公式。

8.     將樣品OD值代入公式計(jì)算NO濃度。

 

說明：

1.    在30 min內(nèi)測完，以免退色而降低靈敏度。

2.    快速測定：如果樣品NO濃度較高，則可將Griess R1和R2預(yù)先1:1等體積混合后，各取100 μl混合試劑與50 μl樣品反應(yīng)測定。

3.    樣品所賴以存在的液體的內(nèi)在成分會(huì)干擾測定，降低OD值和靈敏度。干擾程度：尿液>血清>血漿>培養(yǎng)基>蒸餾水。

4.    每次測量必須新做標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量用與樣品相同的液體稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

5.    細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的紅色顏色不影響測定。

 

以下為使用普利萊NO檢測試劑盒發(fā)表的文章，供參考：

1、Ji Y, Sun X, Liu X Y, et al. Toxoplasma gondii: effects of exogenous nitric oxide on egress of tachyzoites from infected macrophages[J]. Experimental parasitology, 2013, 133(1): 70-74.

2、Hong Q, Qi K, Feng Z, et al. Hyperuricemia induces endothelial dysfunction via mitochondrial Na+/Ca 2+ exchanger-mediated mitochondrial calcium overload[J]. Cell calcium, 2012, 51(5): 402-410.

3、Ding Y, Zhang Z F, Dai X Q, et al. Myricetin protects against cytokine-induced cell death in RIN-m5f β cells[J]. Journal of medicinal food, 2012, 15(8): 733-740.