葡萄糖氧化酶法測定試劑盒 (適用于組織、細胞等)   E1011

貨號	產品名稱	規(guī)格	價格（元）
E1011	組織細胞葡萄糖氧化酶法測定試劑盒	105次	560

描述：葡萄糖能夠為組織細胞提供能量。生理性饑餓、劇烈運動、營養(yǎng)不良狀態(tài)都會導致血糖降低，糖尿病、肥胖等疾病會使血糖升高。采用氧化酶法進行葡萄糖含量測定，是世界衛(wèi)生組織和中國《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的臨床血糖檢測方法。本試劑盒對此法經(jīng)過改良，使檢測靈敏度比普通方法提高約10倍，其檢測下限為5~10μmol/L，線性范圍在10~20000 μmol/L。適用于測定動物組織細胞內低濃度葡萄糖含量，也勝任各種臨床和基礎實驗中對于葡萄糖含量的測量。

原理：根據(jù)Trinder反應原理^1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和過氧化氫(H₂O₂)；然后用過氧化物酶(POD)催化過氧化氫，使色原物質(4-氨基安替比 林)生成醌亞胺，顏色的深淺與葡萄糖濃度成正比。

適用范圍：適用于動物實體組織、培養(yǎng)細胞中葡萄糖含量的測定。

組成 (105次微量檢測)：

(1)1  ml葡萄糖標準品10 mmol/L (等于180 mg/100 ml)；

(2) 16 ml試劑R1；(3)4 ml試劑R2；(4)50 ml裂解液

以上組分4 oC保存6個月有效。

所需設備：721、722型可見光分光光度計、酶標儀、生化分析儀。最佳工作波長550-555nm，如儀器無此波長建議優(yōu)先選用570、530、490nm。

操作步驟：

一．組織細胞裂解：1、動物細胞：離心收集細胞后，通常情況下，可按比例每1x10⁶ 個細胞加入0.05-0.1ml裂解液，震蕩裂解后室溫靜置10分鐘。2、實體組織：離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約50mg)。建議按每1mg組織加入5-10μl裂解液，用玻璃勻漿器或者電動勻漿器勻漿破碎組織，勻漿后室溫靜置10分鐘。

二．裂解液處理：取適量上清液轉移到1.5ml離心管中，余下的裂解液可用BCA法蛋白定量試劑盒(P1511)進行蛋白定量或－20oC儲存。

三．工作溶液配制：按4:1比例，取8 ml試劑R1與2 ml試劑R2混合得到10 ml 工作溶液。當天使用或4oC保存1周。

四．標準品稀釋：10 mM葡萄糖標準品用蒸餾水或與樣本緩沖液一致的液體稀釋為2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625μM。注意設置0濃度對照反應管。由于葡萄糖測定反應的線性關系甚好且范圍很寬，通常設置黑體標記的4管即可，一般不需要設置大于2~10mM的標準管，以此得到的標準曲線用來測定大于2 mM葡萄糖濃度通常不會失真。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦也可僅設置單一濃度的標準管。注意：不能使用用戶自己簡單配制的葡萄糖標準溶液。

五．葡萄糖含量測定：

1.      參見下表加樣。先加標準品或待測樣品，后加工作溶液。可依據(jù)葡萄糖濃度高低微量調整樣品與工作液體積比例。超出線性范圍可適當稀釋。

2.      37oC 反應20min (15~30min)或25oC室溫反應30 min但靈敏度略降。反應平衡后顏色在60 min內穩(wěn)定。

3.      先用蒸餾水+工作液空白管調零，然后測定各管OD5值。

4.      繪制標準曲線并計算葡萄糖濃度。

附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸，濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-。

5.      如果僅用單一標準管：葡萄糖濃度(mmol/L) = 標準品濃度 × (樣品管OD－空白管OD) / (標準管OD－空白管OD)。

6.  以每mg蛋白濃度或細胞數(shù)校正葡萄糖含量。