血液低密度脂蛋白/極低密度值脂蛋白-膽固醇（LDL/VLDL-C）酶法測定試劑盒     E1018

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	價(jià)格（元）
E1018	血液低密度脂蛋白極低密度脂蛋白-膽固醇（LDLVLDL-C）酶法測定試劑盒	250次	1380

描述：血漿中的脂質(zhì)以脂蛋白-膽固醇-甘油三酯復(fù)合物形式存在。由肝臟生成的極低密度脂蛋白復(fù)合物(VLDL)，因富含甘油三酯而密度很低；隨著其甘油三酯逐漸水解利用，VLDL 變成 IDL 復(fù)合物并失去 Apo E 和Apo C2，轉(zhuǎn)變成為富含 Apo B100 和膽固醇的 LDL 復(fù)合物。血低密度脂蛋白 LDL 攜帶大量膽固醇，與動(dòng)脈粥樣硬化形成正相關(guān)，是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素。臨床常規(guī)血脂檢驗(yàn)包括四項(xiàng)：總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白-膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白-膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、甘油三酯(triglyceride，TG)。血漿總膽固醇包括2/3的膽固醇酯和1/3的游離膽固醇。LDL/VLDL-C的測定需要預(yù)先分離不同密度的脂蛋白復(fù)合物，再測定其中的膽固醇含量。

原理：試劑盒采用世界衛(wèi)生組織(WHO)、美國FDA、中國《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的HDL分離方法和膽固醇測定方法，操作簡便可靠，靈敏度高，檢測范圍20~5000 μmol/L，重復(fù)性佳。采用CHOD-PAP終點(diǎn)法結(jié)合經(jīng)典GPO Trinder酶學(xué)反應(yīng)¹：(1) 膽固醇酯酶分解膽固醇酯為游離膽固醇。(2) 膽固醇氧化酶將游離膽固醇氧化。(3) 反應(yīng)過程產(chǎn)生過氧化氫。(4) 在過氧化物酶催化下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，光密度值與膽固醇濃度成正比。

組成：（250次）

(1) LDL/VLDL捕獲劑  13ml

(2) R1  40ml

(3) R2  10ml

(4) 5 mmol/L膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品   0.5ml

4oC保存，6個(gè)月有效

樣品準(zhǔn)備：人和動(dòng)物的自然凝固后血清、EDTA抗凝血漿。不建議使用肝素抗凝。新鮮血液4oC 2000 g離心5 min得到血漿，非抗凝血4oC放置2小時(shí)得到血清。可4oC存放數(shù)天或?20 oC半年。如超過線性范圍用生理鹽水1:1~1:5稀釋后測定。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀、可見光分光光度計(jì)。最佳工作波長550-555nm，如無此波長建議優(yōu)先選用570、530、490nm。比色杯光徑1cm。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：5 mM膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品用無水乙醇倍比稀釋為2500、1250、625、312.5、156、78、36 μmol/L。通常設(shè)置稀釋4個(gè)點(diǎn)/管即可，注意設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。立即使用，用畢棄去。

1. LDL/VLDL -膽固醇分離步驟

1.1. 取50 μL血清或血漿(樣品體積范圍20-100 μL)

1.2. 加等體積50 μL的LDL/VLDL捕獲劑，振蕩混勻。

1.3. 室溫孵育10分鐘。沉淀10-30分鐘、室溫或4oC不影響結(jié)果，但條件要一致。

1.4. 2000 g離心20分鐘。離心溫度4～22度均可，不同樣品離心條件要一致。

1.5. 沉淀含有LDL/VLDL-膽固醇。小心吸除上清，再次2000 g 離心 10 分鐘，棄盡上清。

1.6.  加入 100 μL PBS 或生理鹽水（初始血漿樣品的

2 倍體積），振蕩重懸沉淀。。

2. LDL/VLDL-膽固醇測定步驟：

2.1. 配制測定工作液: 按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合，立即使用。4oC保存<1天，變色棄去。

2.2. 取190 μl測定工作溶液，加入微板孔內(nèi)。

2.3. 加入步驟1.6制備的上清液10μL。上清液體含HDL-膽固醇，放置后如有絮狀物應(yīng)再次離心。標(biāo)準(zhǔn)品管的加樣量也是10 μl標(biāo)準(zhǔn)品。反應(yīng)總體積200 μl。

2.4. 37oC 20min (15~30min)?；?/span>25oC室溫反應(yīng)30 min但靈敏度略低。反應(yīng)平衡后顏色在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.5. 先用蒸餾水空白管調(diào)零。然后測定各管OD550值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算總膽固醇濃度。Excel作圖步驟參考：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R²值。

說明：

1.    可微量調(diào)整樣品與工作液體積比例。

2.    正常人血中總膽固醇參考值2.86~5.98mmol/L或 110~230mg/dl。

3.    維生 素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、強(qiáng)還原劑二硫蘇糖醇、巰基乙醇等干擾測試。

 

參考文獻(xiàn)

1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145