描述：葡萄糖能夠?yàn)榻M織細(xì)胞提供能量。生理性饑餓、劇烈運(yùn)動(dòng)、營養(yǎng)不良都會導(dǎo)致血糖降低，糖尿病、肥胖等疾病會使血糖升高。采用氧化酶法進(jìn)行葡萄糖含量測定，是世界衛(wèi)生組織和中國《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的臨床血糖檢測方法。本試劑盒對此法經(jīng)過改良，使檢測靈敏度比普通方法提高約10倍，其檢測下限為5~10μmol/L，線性范圍在10~20000 μmol/L。適用于測定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)的低濃度葡萄糖含量，也勝任各種臨床和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中對于葡萄糖含量的測量。

原理：根據(jù)Trinder反應(yīng)原理^1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和過氧化氫(H₂O₂)；然后過氧化物酶(POD)催化過氧化氫，使色原物質(zhì)(4-氨基安替 比林)生成醌亞胺，顏色的深淺與葡萄糖濃度成正比。

參考文獻(xiàn)：

1.         Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2.         Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145.

適用范圍：測定人及動(dòng)物血清、血漿、腦脊液、等樣品中的葡萄糖含量

組成：(1)1ml 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10 mmol/L (相當(dāng)于180 mg/100 ml)    (2) 32 ml 試劑R1   (3) 8 ml  試劑R2  

儲存條件：4 oC 保存  6個(gè)月有效

所需設(shè)備：721、722型可見光分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、生化分析儀。最佳工作波長550-555nm，如儀器無此波長建議優(yōu)先選用570、530、490nm。

操作步驟：

一．工作溶液配制：按4:1比例，取8 ml試劑R1與2 ml試劑R2混合得到10 ml 工作溶液。當(dāng)天使用或4oC保存1周。

二．標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：10 mM葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水或與樣本緩沖液一致的液體稀釋為2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625μM。注意設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。由于葡萄糖測定反應(yīng)的線性關(guān)系甚好且范圍很寬，通常設(shè)置黑體標(biāo)記的4管即可，一般不需要設(shè)置大于2~10mM的標(biāo)準(zhǔn)管，以此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線用來測定大于2 mM葡萄糖濃度通常不會失真。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦也可僅設(shè)置單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)管。注意：不能使用用戶自己簡單配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

三、葡萄糖含量測定：

1.     參見下表加樣。先加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，后加工作溶液。可依據(jù)葡萄糖濃度高低微量調(diào)整樣品與工作液體積比例。超出線性范圍可適當(dāng)稀釋。

2.     37oC 反應(yīng)20min (15~30min)或25oC室溫反應(yīng)30 min但靈敏度略降。反應(yīng)平衡后顏色在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

3.     先用蒸餾水+工作液空白管調(diào)零，然后測定各管OD值。

4.     繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算葡萄糖濃度。

附Excel作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)Вx擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R²值-。

5.     如果僅用單一標(biāo)準(zhǔn)管：葡萄糖濃度(mmol/L) = 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 × (樣品管OD－空白管OD) / (標(biāo)準(zhǔn)管OD－空白管OD)。