1916年湯姆和柯里以曲霉屬菌進(jìn)行試驗(yàn)，證實(shí)大多數(shù)曲霉菌如泡盛曲霉、米曲霉、溫氏曲霉、綠色木霉和黑曲霉都具有產(chǎn)檸檬酸的能力，而黑曲霉的產(chǎn)酸能力更強(qiáng)。如柯里以黑曲霉為供試菌株，在15％蔗糖培養(yǎng)液中發(fā)酵，對(duì)糖的吸收率達(dá)55％。1923年美國(guó)菲澤公司建造了世界上家以黑曲霉淺盤發(fā)酵法生產(chǎn)檸檬酸的工廠。隨后比利時(shí)、英國(guó)、德國(guó)、蘇聯(lián)等相繼研究成功發(fā)酵法生產(chǎn)檸檬酸。這樣，依靠從柑橘中提取天然檸檬酸的方法逐漸為發(fā)酵法所取代。1950年前，檸檬酸采用淺盤發(fā)酵法生產(chǎn)。19Chemicalbook52年美國(guó)邁爾斯試驗(yàn)室采用深層發(fā)酵法大規(guī)模生產(chǎn)檸檬酸。此后，深層發(fā)酵法逐漸建立起來(lái)。深層發(fā)酵周期短，產(chǎn)率高，節(jié)省勞動(dòng)力，占地面積小，便于實(shí)現(xiàn)儀表控制和連續(xù)化，這一制造技術(shù)仍是目前最主要的制造方法。在這個(gè)技術(shù)中，黑曲霉被放入含有蔗糖或葡萄糖的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以生產(chǎn)檸檬酸。糖類的來(lái)源包括玉米漿、糖蜜發(fā)酵液、玉米粉的水解產(chǎn)物或其他廉價(jià)的糖類溶液。在去除霉菌之后，向剩余的溶液中加入氫氧化鈣，使檸檬酸反應(yīng)生成檸檬酸鈣沉淀，分離出沉淀之后再加入硫酸就可以得到檸檬酸。