上海博爾森生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: Elisa試劑盒, PCR檢測(cè)試劑盒, 重組蛋白, 蛋白定制, 細(xì)胞系, 原代細(xì)胞, 常用實(shí)驗(yàn)試劑, 染色液, 血清
博爾森-BIOESN-大鼠糖蛋白A33(GPA33)-ELISA-Kit
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Elisa試劑盒, PCR檢測(cè)試劑盒, 重組蛋白, 蛋白定制, 細(xì)胞系, 原代細(xì)胞, 常用實(shí)驗(yàn)試劑, 染色液, 血清
大鼠糖蛋白A33(GPA33) ELISA Kit
檢測(cè)原理:
博爾森生物(BIOESN)生產(chǎn)的ELISA試劑盒采用抗體夾心法:將抗某蛋白抗體包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的某蛋白與抗體結(jié)合,加入生物素化的抗某蛋白抗體,再加入SABC復(fù)合物與生物素抗體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,然后加入TMB顯色底物,顯色劑顯藍(lán)色,最后加終止液變黃色,游離的成分被洗去。在450 nm處測(cè)OD值,某蛋白濃度與OD值之間呈正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中某蛋白的濃度。
試劑盒組分: (保存溫度4℃)
名 稱(chēng) | 規(guī)格(48 T) | 規(guī)格(96 T) |
預(yù)包被酶標(biāo)板 | 8×6條 | 8×12條 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 1支 | 1支 |
標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液 | 10ml | 15ml |
生物素化檢測(cè)抗體(100×) | 60ul | 120ul |
生物素化檢測(cè)抗體稀釋液 | 6ml | 12ml |
SABC復(fù)合物 | 6ml | 12ml |
TMB顯色液(A/B) | 各3ml | 各6ml |
終止液 | 6ml | 12ml |
20×濃縮洗滌液 | 30ml | 60ml |
封板膠紙 | 2張 | 4張 |
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 |
本試劑盒用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及其它生物體液。
標(biāo)本收集與試劑準(zhǔn)備:
1. 血清、血漿樣本收集應(yīng)使用一次性的無(wú)熱原,無(wú)內(nèi)毒素試管(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可),血清、血漿避免使用溶血,高血脂標(biāo)本,標(biāo)本懸浮物應(yīng)離心去除,使標(biāo)本清澈透明。待測(cè)樣本應(yīng)盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-80℃)保存,避免反復(fù)凍融。
2. 洗滌液配置:用蒸餾水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?/font>1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水)
3. 標(biāo)準(zhǔn)品配制:取7個(gè)1.5ml離心管,分別標(biāo)注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,blank。從第一至七管中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液200ul。在第一管中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul,置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡?/font>六管中吸出200ul棄去,第七管為空白對(duì)照。
4.
5. 生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘,用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液,根據(jù)所需用量配置,當(dāng)日使用,剩余棄之。
6. TMB顯色液的配置:使用前10分鐘,將TMB顯色液A液和B液1:1混合,避光放置備用。
7. 如果您檢測(cè)的樣本中靶蛋白濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,建議重新檢測(cè),請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。
檢測(cè)程序:
1. 加樣:空白孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液,其余孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品50ul,將反應(yīng)板混勻后置37℃,40分鐘。
2. 洗板:用1×洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,每孔加入1×洗液350μl,每次震蕩/浸泡1-2分鐘,向?yàn)V紙上印干。
3. 空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液,其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul,混勻后置37℃,30分鐘。
4. 洗板:同上。
5. 每孔加入SABC復(fù)合物工作液100ul,混勻后置37℃,20分鐘。
6. 洗板:同上。
7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul,混勻后置37 ℃暗處反應(yīng)10-20分鐘(具體顯色時(shí)間根據(jù)顯色結(jié)果而定)。
8. 每孔加入100ul終止液,混勻,30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果判斷與計(jì)算:
1. 所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算,如空白OD低于0.1,也可以直接計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),OD值作縱坐標(biāo),手工繪制或用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能:
1、 檢測(cè)范圍:1.56-100ng/mL
2、 特異性:同時(shí)可檢測(cè)重組或天然的某種蛋白或抗體,不與其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3、 重復(fù)性:板內(nèi),板間變異系數(shù)均小于10%。
注意事項(xiàng)
1. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙孔檢測(cè),每次檢測(cè)都應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高,從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,37℃水浴使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。
3. 檢測(cè)時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫,板條開(kāi)封后剩余板條需封好,放回袋中2 個(gè)月內(nèi)用完。
4. 試劑盒使用超敏TMB溶液,若顯色過(guò)深會(huì)出現(xiàn)絮狀物,屬正?,F(xiàn)象,不影響結(jié)果判讀。
5. 僅用于科研,不能用于臨床診斷!