武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司
主營產(chǎn)品: 檢測
染色體原位雜交-植物組織原位雜交檢測-植物組織原位雜交
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钳钼钺钺钹钵钻钸钵钴钴
原位雜交;原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱為原位雜交!
使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
以菌落原位雜交為例:對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行克8隆篩選時(shí),可采用本方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后,對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
原位雜交中探針的選擇
DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記。寡核苷酸探針的長度較短,因此避免了探針內(nèi)部退火的問題,在雜交時(shí)的滲透能力也更好,探針與靶標(biāo)的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時(shí)需要控制探針片段長度,通常300-1000bp左右,能覆蓋到較長片段的靶核酸序列,增加檢測的靈敏度。
使用分支DNA信號(hào)擴(kuò)增的RNA FISH
Invitrogen? ViewRNA?和PrimeFlow?檢測是使用分支DNA信號(hào)擴(kuò)增 (bDNA) 來檢測特異性信號(hào)的直接熒光RNA ISH方法。 使用獨(dú)立但兼容的信號(hào)擴(kuò)增系統(tǒng)讓RNA靶標(biāo)的多重復(fù)用成為可能。 熒光RNA原位雜交檢測分為四個(gè)主要步驟:樣本制備、靶標(biāo)雜交、信號(hào)擴(kuò)增以及檢測。 該方法可實(shí)現(xiàn)更高的特異性,更低的背景值和更高的信噪比。