原位雜交技術(shù) 染色體原位雜交
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原位雜交技術(shù)-染色體原位雜交

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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司

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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng):動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng):動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)







原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面

1.細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位,如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測(cè)。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè)。

4.基因在染色體上的定位。

5.檢測(cè)染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳








間接標(biāo)記的方法中應(yīng)用了報(bào)告分子標(biāo)記的探針,報(bào)告分子通過親和酶促的方法進(jìn)行顯色。常用的報(bào)告分子如地高6辛,生物素。結(jié)合地高6辛抗6體或鏈霉親和素上耦聯(lián)的酶系統(tǒng)進(jìn)行間接的底物反應(yīng)檢測(cè)。地高6辛標(biāo)記核酸的歷史可追溯到1987年,由于地高6辛是洋地黃的花和葉中特有的成分,檢測(cè)時(shí)使用的地高6辛抗6體不會(huì)結(jié)合于其他的生物分子。這是相較于生物素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)。地高6辛抗6體上可耦聯(lián)堿性磷酸酶、過氧化酶,及熒光分子和膠體金等,根據(jù)不同的應(yīng)用需求,呈現(xiàn)高信噪比的核酸檢測(cè)結(jié)果。但需注意,由于引入了免6疫檢測(cè)反應(yīng),在放大檢測(cè)靈敏度的同時(shí),應(yīng)注意樣品內(nèi)源性酶的滅活,以降低檢測(cè)背景。

通過不同標(biāo)記方法的聯(lián)合應(yīng)用,還可在同一樣本中實(shí)現(xiàn)染色體不同區(qū)域或細(xì)胞樣本中不同RNA序列的多重檢測(cè)。





就DNA探針和RNA探針的比較,DNA探針在雜交過程中會(huì)出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用,將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。

Tips:RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性,其檢測(cè)特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進(jìn)行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴(kuò)增的方法,可以更方便地進(jìn)行RNA探針的制備;RNA探針合成后,還需驗(yàn)證其對(duì)目標(biāo)片段檢測(cè)的靈敏度和特異性。





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