博研生物-豬血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒-科研
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豬血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒
為了研制長效犬β干擾素(Ca IFNb)基因工程產品,用聚合酶鏈反應從犬基因組DNA擴增Ca IFNb成熟肽編碼序列,插入類彈性蛋白多肽(ELP)融合表達載體,將重組載體轉化大腸桿菌BLR(DE3),用IPTG誘導Ca IFNb-ELP表達,利用ELP介導的溫度敏感可逆相變循環(huán)(ITC)進行純化,用50%細胞病變試驗檢測干擾素活性,用50%小鼠血漿孵育法檢測體外半衰期,并與融合組氨酸標簽的His-Ca IFNb進行比較.結果顯示,在≤28℃條件下,90%Ca IFNb-ELP為可溶性表達,His-Ca IFNb以不溶性包涵體表達;在優(yōu)化條件下進行1輪ITC,獲得的Ca IFNb-ELP的純度為96%,顯著高于以包涵體純化的His-Ca IFNb的純度(85%);Ca IFNb-ELP的活性為1×105 U/mg,比His-Ca IFNb的活性高10倍;Ca IFNb-ELP的體外半衰期〉24 h,顯著長于His-Ca IFNb的體外半衰期(12 h).結果表明,Ca IFNb-ELP具有表達水平高,純化簡單和體外半衰期較長等優(yōu)點,有望作為長效干擾素開發(fā)利用.
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬白細胞介素1(IL-1)水平.用純化的豬白細胞介素1抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入豬白細胞介素1,再與HRP標記的IL-1抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的IL-1呈正相關.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬白細胞介素1(IL-1)濃度.