牛乙酰輔酶A羧化酶(ACC)ELISA試劑盒

南京博研生物科技有限公司  ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV） IgM 抗體ELISA檢測。

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    O157(E.Coli O157)大腸桿菌是腸出血性大腸桿菌中最多見的1個血清型,人食入被大腸桿菌污染的食物會引發(fā)食物中毒.1996年,日本暴發(fā)了O157導致的人群感染,近期在韓國,中國臺灣等國家和地區(qū)均有O157感染的報道,1998年中華人民共和園皇崗出入境檢驗檢疫局(深圳)從香港進口的冰鮮魚中檢出了O157大腸桿菌.為保護我國畜牧業(yè)生產(chǎn)和人民健康,防止O157大腸桿菌在我國蔓延,建立快速技術(shù)是十分必要的.

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為了建立一種有效的牛結(jié)核病間接ELISA方法,本研究設(shè)計了3對引物,從牛分枝桿菌ValleeⅢ菌株的基因組中PCR擴增出三個目的基因mpb70、mpb83和esat-6,采用重疊延伸剪接技術(shù)(splice by overlapping extension,SOE)獲得融合基因mpb70-mpb83。經(jīng)過多次亞克隆步驟后,將DNA片段mpb70-mpb83和esat-6串連于同一表達載體pET32a(+)中,獲得了重組質(zhì)粒pET70-83-E6。將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)大腸桿菌感受態(tài)后,經(jīng)IPTG誘導表達帶有兩個六組氨酸標簽的融合蛋白rM70-83-E6。以Ni~(2+)鰲合層析的方法純化該融合蛋白。Western blot分析表明該蛋白具有良好的免疫反應(yīng)活性。 以融合蛋白rM70-83-E6作為包被抗原,在確定了封閉液和包被條件后,采用正交試驗設(shè)計的方法摸索了抗原、一抗和二抗稀釋度,以及一抗、二抗作用時間和顯色時間,建立了檢測牛結(jié)核病抗體的間接ELISA方法。用150份健康牛血清的檢測結(jié)果統(tǒng)計分析后確定方法的判定標準,即樣本S/P大于0.5為陽性,小于0.4為陰性,兩者之間為可疑。 通過對85份牛結(jié)核病血清和100份無結(jié)核病牛血清的檢測結(jié)果表明,ELISA方法的敏感性為69.41%(59/85),特異性為96%(96/100)。對50份PPD陰性血清和67份PPD陽性血清(117份)進行檢測,并與PPD皮試進行比較,本方法與PPD皮試的符合