豬載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒

豬載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒

為了研制長(zhǎng)效犬β干擾素(Ca IFNb)基因工程產(chǎn)品,用聚合酶鏈反應(yīng)從犬基因組DNA擴(kuò)增Ca IFNb成熟肽編碼序列,插入類(lèi)彈性蛋白多肽(ELP)融合表達(dá)載體,將重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BLR(DE3),用IPTG誘導(dǎo)Ca IFNb-ELP表達(dá),利用ELP介導(dǎo)的溫度敏感可逆相變循環(huán)(ITC)進(jìn)行純化,用50%細(xì)胞病變?cè)囼?yàn)檢測(cè)干擾素活性,用50%小鼠血漿孵育法檢測(cè)體外半衰期,并與融合組氨酸標(biāo)簽的His-Ca IFNb進(jìn)行比較.結(jié)果顯示,在≤28℃條件下,90%Ca IFNb-ELP為可溶性表達(dá),His-Ca IFNb以不溶性包涵體表達(dá);在優(yōu)化條件下進(jìn)行1輪ITC,獲得的Ca IFNb-ELP的純度為96%,顯著高于以包涵體純化的His-Ca IFNb的純度(85%);Ca IFNb-ELP的活性為1×105 U/mg,比His-Ca IFNb的活性高10倍;Ca IFNb-ELP的體外半衰期〉24 h,顯著長(zhǎng)于His-Ca IFNb的體外半衰期(12 h).結(jié)果表明,Ca IFNb-ELP具有表達(dá)水平高,純化簡(jiǎn)單和體外半衰期較長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn),有望作為長(zhǎng)效干擾素開(kāi)發(fā)利用.

豬載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬白細(xì)胞介素1(IL-1)水平.用純化的豬白細(xì)胞介素1抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入豬白細(xì)胞介素1,再與HRP標(biāo)記的IL-1抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的IL-1呈正相關(guān).用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬白細(xì)胞介素1(IL-1)濃度.