小鼠ABO組織血型系統(tǒng)轉(zhuǎn)移酶 (BGAT)ELISA試劑盒

研究ABO血型B亞型系統(tǒng)Bw亞型與B糖基轉(zhuǎn)移酶的關(guān)系.方法運(yùn)用血型血清學(xué)鑒定方法鑒定1個(gè)家庭 2例ABO血型的Bw亞型,運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法擴(kuò)增糖基轉(zhuǎn)移酶1～7號(hào)外顯子,送到試劑公司測(cè)序.結(jié)果直接測(cè)序發(fā)現(xiàn)2例ABO血型的Bw亞型,其中 B糖基轉(zhuǎn)移酶基因第721位C> T的轉(zhuǎn)變,導(dǎo)致糖基轉(zhuǎn)移酶多肽鏈Arg241Trp的轉(zhuǎn)變.結(jié)論糖基轉(zhuǎn)移酶基因第721位的C> T的突變引起糖基轉(zhuǎn)移酶活性的消失或者減弱,導(dǎo)致Bw亞型.

ABO(H)血型抗原是人類主要的血型抗原,其抗原表位決定簇為特定的糖鏈結(jié)構(gòu),這些特定的糖鏈可以與多肽結(jié)合形成糖蛋白,或者與脂類結(jié)合形成鞘糖脂。ABO(H)抗原不僅存在于紅細(xì)胞表面,也廣泛分布于人體器官的上皮和內(nèi)皮細(xì)胞,周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元以及母乳、唾液和尿液中。這些寡糖抗原與急性溶血性輸血反應(yīng)以及骨髓和器官移植的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。越來越多的研究表明,這些抗原作為受體在各種、和寄生蟲感染,以及的轉(zhuǎn)移中扮演著重要的角色。ABO(H)血型抗原包括A抗原特征三糖、B抗原特征三糖和H抗原特征二糖,三種抗原表位決定簇。根據(jù)其生物合成途徑中二糖前體結(jié)構(gòu)的不同,ABO(H)抗原可以進(jìn)一步分為5個(gè)亞型。這5種二糖前體分別為Galβ1-3GlcNAcβ1-R(Ⅰ型),Galβ1-4GlcNAcβ1-R(Ⅱ型),Galβ1-3GalNAcα1-R(Ⅲ型),Galβ1-3GalNAcβ1-R(Ⅳ型),Galβ1-4Glcβ1-R(Ⅵ型)。分別以這5種二糖前體為底物,在3種糖基轉(zhuǎn)移酶的催化下依次將3種不同的單糖引入到前體二糖的非還原末端就得到全部15種天然ABO(H)抗原結(jié)構(gòu)。ABO(H)血型抗原的重要生物學(xué)意義和重要性,使得其抗原的合成成為近60年來糖合成領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。目前,就ABO(H)抗原的合成已發(fā)展出許多不同的方法,如化學(xué)法合成、化學(xué)酶法合成、酶法合成以及全細(xì)胞發(fā)酵等?；瘜W(xué)合成策略的操作條件較為嚴(yán)格,需要繁瑣的保護(hù)、脫保護(hù)操作和大量的分離純化操作,因而導(dǎo)致合成總收率較低,難以實(shí)現(xiàn)大量合成以滿足其生物學(xué)功能的研究。酶法合成方面,酶的來源以及酶的底物專一性限制了其在復(fù)雜寡糖大量合成中的應(yīng)用。全細(xì)胞發(fā)酵通常只能針對(duì)特定的單一抗原結(jié)構(gòu),且產(chǎn)物難以從混合物中得以純化。迄今為止,只有加拿大的Todd Lowary課題組通過化學(xué)合成實(shí)現(xiàn)了全部15種天然ABO(H)血型抗原的系統(tǒng)性合成。本論文成功的發(fā)展了一種多樣化導(dǎo)向的酶法模塊化組裝(enzymatic modular assembly,EMA)策略,實(shí)現(xiàn)了全部15種天然ABO(H)血型抗原結(jié)構(gòu)的系統(tǒng)性合成。本論文工作主要包括以下幾個(gè)方面:(1)通過化學(xué)合成或化學(xué)酶法合成,、快捷的實(shí)現(xiàn)了 5種二糖前體的大量合成。(2)分雖以 Tyβe Ⅰ 二糖(Galβ1-3GlcNAcβProN_3),Tyβe Ⅱ二糖(Galβ1-4GlcNAcβProN_3),Tyβe Ⅲ二糖(Galβ1-3GalNAcαProN_3),Tyβe Ⅳ二糖(Galβ1-3GalNAcβProN)和Type Ⅵ二糖(Galβ1-4GlcβProN_3)為受體,運(yùn)用酶法模塊化組裝策略,通過一步平行反應(yīng),完成了全部5種天然H抗原的合成。(3)以5種H抗原為受體,運(yùn)用2個(gè)不同的酶法組裝模塊,分別平行合成了5種A抗原和5種B抗原。本論文的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)包括以下兩個(gè)方面:(1)實(shí)現(xiàn)了全部15種天然ABO(H)血型抗原的系統(tǒng)性酶法合成。(2)發(fā)展了、快速的酶法模塊化組裝新策略,分別以5種二糖前體為受體,僅通過3步平行合成就實(shí)現(xiàn)了全部15種天然ABO(H)抗原的大量合成。