小鼠抗雙鏈DNA-IgG抗體 (dsDNA-IgG)ELISA試劑盒

抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體的誘生機理不明,試圖研究誘導該自 身抗體產(chǎn)生的相應(yīng)自身抗原.方法:取體外活化的Balb/c小鼠脾細胞及其染色質(zhì)免疫同系小鼠,用ELISA方法檢測IgG類抗雙鏈DNA抗體及其IgG 亞類.結(jié)果:不同原因活化的脾細胞及其染色質(zhì)均可誘導IgG類抗雙鏈DNA抗體產(chǎn)生,且抗體均為IgG1亞類.結(jié)論:活化淋巴細胞及其活性染色質(zhì)是誘導雙 鏈DNA抗體生成的自身免疫原.

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種以凋亡細胞障礙和自身反應(yīng)性B細胞免疫耐受被打破進而導致大量自身抗體產(chǎn)生為特征的復雜的自身免疫性疾病.脾臟邊緣區(qū)巨噬細胞(MZM)在凋亡細胞介導機體免疫耐受方面起著重要作用.MZM缺失或吞噬功能降低會導致包括SLE在內(nèi)的多種嚴重自身免疫性疾病.本課題設(shè)計合成了經(jīng)磷脂酰絲氨酸(PS)表面修飾的負載LXR激動劑T0901317的金納米籠(T0901317@Lipo-AuNC-PS),通過靶向巨噬細胞(Mφ)表面特異性的PS識別受體,促進吞噬受體的表達并增強其吞噬凋亡細胞的能力,進而SLE的病程進展. 方法:流式細胞術(shù)和熒光顯微鏡檢測骨髓來源巨噬細胞(BMDM)對載藥納米粒子的吞噬功能;采用考馬斯亮藍法檢測狼瘡鼠24h尿蛋白水平,狼瘡鼠血肌酐水平通過小鼠血肌酐ELISA試劑盒檢測,并通過免疫熒光顯微鏡觀察IgG在腎臟的沉積;采用抗雙鏈DNA抗體檢測試劑盒檢測狼瘡鼠血清dsDNA水平,CBA流式微球技術(shù)檢測各細胞因子的分泌水平;并通過流式細胞術(shù)檢測CD169+巨噬細胞表面Mer的表達,結(jié)合組織病理切片觀察其對肝臟的副作用. 結(jié)果:T0901317@Lipo-AuNC-PS處理的狼瘡鼠BMDM對凋亡胸腺細胞的吞噬率顯著高于無PS靶向的T0901317@Lipo-AuNC,T0901317,Lipo-AuNC-PS,Lipo-AuNC和PBS組;和上述各組相比,尾靜脈注射

利用Sm抗原模擬表位肽免疫BALB/C小鼠,構(gòu)建狼瘡樣鼠模型.方法用鼠Sm單克隆抗 體對噬菌體隨機12肽庫進行親和篩選,將篩選的噬菌體陽性克隆行雙抗體夾心ELISA檢測,DNA序列測定并推導其氨基酸序列,初步確定Sm抗原模擬表 位;進而用混合噬菌體陽性克隆皮下免疫BALB/C小鼠,ELISA法檢測小鼠血清IgG型抗Sm抗體,抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體和抗核抗體 (ANA)水平;直接免疫熒光檢測小鼠腎臟IgG型免疫復合物的沉積以及HE染色觀察小鼠腎臟組織病理損傷情況.結(jié)果免疫篩選獲得的5個ELISA強陽性 的噬菌體克隆的氨基酸序列IR,SQ,PP出現(xiàn)頻率增加;實驗組小鼠血清中第28天出現(xiàn)Sm抗體,dsDNA抗體,ANA抗體,且滴度不斷升高;第33天 出現(xiàn)蛋白尿;腎臟可以檢測到IgG型免疫復合物沉積及明顯的腎臟病理改變.對照組小鼠無明顯自身抗體產(chǎn)生和腎臟病變.結(jié)論利用Sm抗原噬菌體模擬表位肽可 成功構(gòu)建狼瘡樣小鼠模型.