河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒
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產(chǎn)地 國內(nèi)
品牌 上海滬崢
規(guī)格 50T/盒
貨號 HZT2462
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基本信息
用途范圍:僅限科研
純度:詳詢客服%
產(chǎn)地:國內(nèi)
品牌:上海滬崢
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河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒
試劑盒準備物品
清理液(A)                                    毫升
染色液(t B)                                  微升
稀釋液(C)                                    毫升
溶解液(tD)                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                       1份
反應(yīng)五要素
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒注意事項
1.基礎(chǔ)程序。
2.擴增溫度和延伸溫度。
3.反應(yīng)時間。
4.循環(huán)次數(shù)。
5.PCR 反應(yīng)液的配制。
6.PCR技術(shù)的基本原理。
7.PCR的反應(yīng)動力學(xué)。
8.PCR擴增產(chǎn)物。
9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。






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