單純皰疹病毒(HSV)試劑盒(熒光-PCR法)

規(guī)格：50T/盒

英文名稱(chēng)：HSV Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒對(duì)單純皰疹病毒(HSV)基因保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。

試劑組成】

名 稱(chēng)	規(guī) 格
酶液	50μL×1 管
HSV反應(yīng)液	500μL×2 管
HSV陽(yáng)性質(zhì)控品	50μl ×1 管
陰性質(zhì)控品	250μl×1 管

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測(cè)儀。
【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰代。

結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道 35值≤38，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35值≤38， 且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct 值>38 或無(wú) Ct 值；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程， 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

單純皰疹病毒(HSV)試劑盒(熒光-PCR法)樣本提取操作

1. 取 200μL 處理好的樣本（不足 200μL，可以加入 PBS 緩沖液或者生理鹽水補(bǔ)足 200μL），加入 500μL

裂解液，振蕩 30 秒，室溫靜止 2 分鐘。注：針對(duì)   難裂解樣本，室溫靜置時(shí)間可延長(zhǎng)至5 分鐘。

2. 把上述混合液轉(zhuǎn)移到吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時(shí)盡量不要吸到懸浮雜質(zhì)，以免阻塞吸附膜），10000rpm 離心 1 分鐘，棄去套管中液體。

3. 向吸附柱中加入 500μL 去蛋白漂洗液，12000rpm 離心 30 秒，棄去套管中液體。

4. 向吸附柱中加入 500μL 洗滌液，12000rpm 離心 30 秒，棄去套管中液體。

5. 向吸附柱中加入 500μL 洗滌液，12000rpm 離心 30 秒，棄去套管中液體。

6. 12000rpm 再次離心 2 分鐘。

7. 把吸附柱轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL 滅菌離心管中，向吸附柱中加入 50μL 洗脫液，并于室溫溫育 2 分鐘。

8.12000rpm 離心 1 分鐘，棄去吸附柱，1.5mL 滅菌離心管中液體即為 DNA/RNA 溶液。提取的 DNA/RNA

可直接用于各種下游應(yīng)用試驗(yàn)，如不立即使用，請(qǐng)于-80℃保存。