DOP-PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn) DOP-PCR（Degenerate Oligonucleotide Primer PCR，簡(jiǎn)并寡聚核苷酸引物PCR）是擴(kuò)增全基因組的方法之一，它利用中間含有 6 個(gè)隨機(jī)堿基的 22nt 引物，通過兩輪 PCR（一輪低溫復(fù)性，第二輪高溫復(fù)性）而將模板 DNA 擴(kuò)增。DOP-PCR擴(kuò)完整基因組的效率不如利用 phi 29 DNA 聚合酶的 MDA，但在擴(kuò)增高度降解的痕量 DNA 方面具有巨大優(yōu)勢(shì)，在法醫(yī)鑒定領(lǐng)域具有重要應(yīng)用。本產(chǎn)品就是在 DOP-PCR基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化而開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：
1. 專門用于高度降解的 DNA，方便，含有除模板 DNA 和引物以外的所有成份，簡(jiǎn)化了準(zhǔn)備工作。
2. 優(yōu)化的引物濃度，使自連序列和非模板相關(guān)序列的合成。
3. 使用高保真酶，降低突變率。
4. 長(zhǎng)度在 300-1700bp 之間，平均 500bp 左右。
5. 模板基因 DNA 用量一般為 10-100pg。
6. 所得 PCR 產(chǎn)物可用于 STR 多重?cái)U(kuò)增、比較基因組雜交、單染色體文庫構(gòu)建、基因組圖譜研究等。
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存, 保存期限為 12 個(gè)月。不要反復(fù)凍融。
自備試劑 DNA 模板、引物、超純水。

使用方法 1. 在一干凈的 PCR 管中，加入下列成分：成分 陰性對(duì)照 樣品
DOP-PCR MagicMix 25 uL 25 uL
基因組 DNA 模板(自備) 10-100 pg（或 不加或單個(gè)細(xì)胞 一個(gè)單個(gè)細(xì)胞）
DOP-PCR 引物 (20 pmol/uL) 5 uL 5 uL
補(bǔ)水到 50 uL 50 uL
2. 放入 PCR 儀中按下列參數(shù)進(jìn)行 DOP-PCR。
預(yù)變性 95℃ 5 min 94℃ 1 min
一輪 PCR 30℃ 1.5 min
(12 個(gè)循環(huán)) 72℃（30℃升到 72℃的時(shí)間3 min 設(shè)定為 3 分鐘）
94℃ 1 min第二輪 PCR 62℃ 1 min
(35 個(gè)循環(huán)) 72℃（每次循環(huán)后此步的保溫
2 min 時(shí)間延長(zhǎng) 14 秒）
延伸 72℃ 7 min
4℃ Forever
3. 結(jié)束后取 5-10 uL 直接上樣電泳（不需要額外再加 DNA 上樣液）, 紅色染料電泳速度相當(dāng)于 50 bp DNA 片段。DOP-PCR 產(chǎn)物的長(zhǎng)度一般在 300-1700 bp之間。
4. 所得 DOP-PCR 產(chǎn)物可以用于后續(xù) PCR 檢測(cè)或其他分析。