RIPA裂解液（弱強(qiáng)度）

產(chǎn)品及特點(diǎn)RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品裂解能力強(qiáng)度溫和，對(duì)膜蛋白的處理能力一般；對(duì)核蛋白的提取能力較好；對(duì)胞漿蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子處理效果很好。本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑，能有效防止各種蛋白酶對(duì)目的蛋白的降解。我公司各種 RIPA 裂解液產(chǎn)品特點(diǎn)見下表：

產(chǎn)品名稱RIPA 裂解液(強(qiáng))RIPA 裂解液(中)RIPA 裂解液(弱)

有效裂解成分

1% Triton

X-100, 1%

deoxycholate,

0.1% SDS

1% NP-40,

0.5%

deoxycholate,

0.1% SDS

1% NP-40,

0.25%

deoxycholate

裂解強(qiáng)度 強(qiáng) 中 溫和

對(duì)膜蛋白的提取 很好 較好 一般

對(duì)胞漿蛋白的提取 很好 很好 很好

對(duì)核蛋白的提取 很好 較好 較好

胞漿磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好

細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取 很好 很好 很好

含蛋白酶抑制劑 是 是 是

含磷酸酯酶抑制劑 是 是 是

主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP
規(guī)格及成分 成 份 100 mL 包裝
本產(chǎn)品 100 mL
使用手冊 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑 PMSF

使用方法 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，

使 PMSF 的最終濃度為 1mM。

2. 裂解細(xì)胞

2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血

清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比

例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2

秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

注意：通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。

對(duì)于組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。

3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注：RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。