農(nóng)桿菌AGL1化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品及特點AGL1 菌株為 C58, RecA 型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性 基因 rif 和羧芐青霉素抗性基因 carb，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身 轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pTiBo542DT-DNA，此質(zhì)粒含有 vir 基因（vir 基 因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件， pTiBo542DT-DNA 質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移）。

本產(chǎn)品為 AGL1 農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞，適用于水稻、楊樹、擬南芥等植 物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達 103cfu/μg。

基因型:C58 RecA (rif r/carbr ) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine
規(guī)格及成分 成分 編號 10 支包裝
AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞 LM140382 10×100 μL
使用手冊 1 份

運輸及保存 干冰運輸，-80℃保存，有效期一年。

自備試劑 質(zhì)粒 DNA、液氮等

使用方法 轉(zhuǎn)化前準備

1. 冰水浴和 37℃水浴。

2. 液氮或干冰/乙醇混合物。

3. 將抗性平板在 28℃培養(yǎng)箱中平衡至少 15 分鐘。轉(zhuǎn)化方法

1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2. 無菌條件下，向剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細胞懸液中加入需要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒，每 100μL 感受態(tài)細胞加 1μg（體積不大于 10 μL）質(zhì)粒 DNA，輕柔混勻。冰水浴中靜置 5 分鐘。

3. 將離心管置于液氮中速凍 5 分鐘（注：也可以用干冰和無水乙醇混合物替代液氮）。

4. 迅速將離心管置于 37℃水浴靜置中 5 分鐘，不要晃動水面。然后快速轉(zhuǎn)至冰水浴中靜置 5 分鐘。

5. 加入 800 μL 無抗生素的 2×YT 或 LB 液體培養(yǎng)基，28-30℃振蕩培養(yǎng) 2~3小時。使菌體復蘇，表達抗性。

6. 5000rpm 離心 1 分鐘收菌，保留 100 μL 左右上清，輕輕吹打重懸菌體，均勻涂布到含有相應抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，待平板中的液體完全吸收后，倒置平板，28-30℃培養(yǎng) 48-72 小時。（注：當平板只含有 50 μg/mLkan 時，28℃培養(yǎng) 48 小時即可；平板中同時加入 50 μg/mL kan，20 μg/mL rif 時，需 28℃培養(yǎng) 60 小時；如果使用的平板含有 50 μg/mL rif 則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 小時）。