大腸桿菌Tuner(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是大腸桿菌 Tuner(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞。Tuner 系列菌株是 BL21 的 lacZY 缺失突變株，能夠同時(shí)調(diào)整同一培養(yǎng)體系中所有細(xì)胞的蛋 白表達(dá)水平。lac 通透酶（lacY）突變使得 IPTG 均勻進(jìn)入群體所有細(xì)胞，從而獲得濃 度依賴的、水平均一的誘導(dǎo)。通過改變 IPTG 濃度，表達(dá)可從極低水平調(diào)節(jié)到極強(qiáng)的、 完全誘導(dǎo)的表達(dá)水平（通常與所使用的 pET 載體相關(guān)）。低水平表達(dá)可以增強(qiáng)難表達(dá)蛋 白的溶解性和活性。（DE3）宿主菌是 lDE3 溶原菌，染色體上帶有一拷貝由 lacUV5 啟動子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。本感受態(tài)細(xì)胞一般配合 pET 載體一起表達(dá)。

Tuner(DE3)菌株基因型：
規(guī)格及成分成分 編號 10 支包裝
本產(chǎn)品 LM130562-10 0.1mL×10
使用手冊 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根 據(jù)實(shí)際情況分裝使用。 以下實(shí)驗(yàn)以 50 μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適 量的 DNA，通常 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用 移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。

3. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。

4. 每個離心管中加入 450 μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含有相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體 被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

注意：

1 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平 板；若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù) 較少，可通過離心（4,000 rpm ，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布 于平板中。

2 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再 涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 

F – ompT hsdSB (rB – mB –) gal dcm lacY1(DE3)