大腸桿菌SURE化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是采用大腸桿菌 SURE 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可直接用 于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。

本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1. 使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108，-80℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不改變。

2. 主要用于克隆不穩(wěn)定的 DNA 片段，如重復(fù)序列、Z-DNA 等。

3. 本產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

4. 大腸桿菌SURE菌株基因型是K-12,e14-(mcrA-), Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171, endA1, gyrA96, thi-1, supE44, relA1, lac, recB, recJ, sbcC, umuC::Tn5 

(Kanr), uvrC。其基因型符號(hào)及其含義列表如下：

基因型符號(hào) 含義

K-12 本菌種屬于K-12系，本系所有菌種都攜 帶F因子和?、e14、rac三種原噬菌體。

[F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)] 本菌種的 F 因子還攜帶 proAB lacIqZΔM15 Tn10。其中野生型的 proAB 可合成脯氨酸；lacI q使 lacI 抑 制蛋白過(guò)表達(dá)，對(duì) lac 啟動(dòng)子的抑制加 強(qiáng)，降低背景表達(dá)；又叫 lacZ△M15， 編碼?-半乳糖苷酶基因?片段，與攜帶? 片段的質(zhì)?；パa(bǔ)可恢復(fù)酶活性，用于藍(lán) 白斑篩選； Tn10 轉(zhuǎn)座子帶四環(huán)素抗性

e14- (mcrA - ) 本菌種的 e14 原噬菌體缺失，故其攜帶 的mcrA基因也缺失，喪失對(duì)甲基化CG 的切割

endA1 缺失核酸內(nèi)切酶 I

gyrA96 DNA促旋酶突變，導(dǎo)致對(duì)萘啶酮酸和熒 光喹啉的抗性 lac 染色體缺失lac操縱子 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 缺失對(duì)甲基化C的限制、缺失EcoK修飾 限制系統(tǒng)，缺失對(duì)甲基化A的限制 recB recBCD重組系統(tǒng)的重組輔助酶ExoV 失活，重組和損傷修功能復(fù) recJ 重組缺失，降低質(zhì)粒間的重組 relA1 戒嚴(yán)反應(yīng)缺失，RNA合成可以在蛋白合 成停止后繼續(xù)進(jìn)行 sbcC RecF重組途徑突變，有利于擴(kuò)增攜帶回 文結(jié)構(gòu)的噬菌體和質(zhì)粒 supE44 使琥珀終止子編碼谷氨酰胺，為某些質(zhì) 粒和噬菌體生長(zhǎng)所需 thi-1 不能合成硫氨（維生素B1） umuC::Tn5 SOS修復(fù)突變，增加回文結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。 攜帶的Tn5轉(zhuǎn)座子帶卡拉霉素抗性 uvrC UV修復(fù)缺失，增加回文結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 小扁盒包裝
大腸桿菌 SURE 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 LM90208 0.1 mL×10
使用手冊(cè) LM90208sc 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根 據(jù)實(shí)際情況分裝使用。 以下實(shí)驗(yàn)以 50 μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適 量的 DNA，通常 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用 移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。

3. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。

4. 每個(gè)離心管中加入 450 μl 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含有相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃直至液體 被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布 平板；若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的 克隆數(shù)較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm ，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體 后將其涂布于平板中。

2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培 養(yǎng)。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液 再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。