大腸桿菌DB3.1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是采用大腸桿菌 DB3.1 細(xì)胞含有 gyrA462 基因，對(duì)λ噬菌體的 ccdB 基因 產(chǎn)物的毒性具有抵抗作用，特別適合用于轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增包含 ccdB 基因的質(zhì)粒載體。

1. 使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107，-80℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改 變。

2. DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞具有鏈霉素抗性。

3. DB3.1 菌株基因型： F- gyrA 462endA1 Δ(sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(rB-,mB-) supE44 Ara-14 galK2 lac Y1 proA2 rpsL20(SmR) xy1-5 λ- leu mtl1

4. 本產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。
規(guī)格及成分成分 編號(hào) 小扁盒包裝
本產(chǎn)品 140218 0.1mL×10
使用手冊(cè) 140218sc 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。 

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根 據(jù)實(shí)際情況分裝使用。 以下實(shí)驗(yàn)以 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適 量的 DNA，通常 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用 移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。

3. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。

4. 每個(gè)離心管中加入 450 μl 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含有相應(yīng)抗生素的 LB 固體瓊脂 培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃直至液體被吸收， 倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

注意：

1 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平 板；若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù) 較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm ，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布 于平板中。

2 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再 涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。