胚胎裂解液

產(chǎn)品及特點 單細(xì)胞裂解液（RNA 專用）是單細(xì)胞 RNA 提取專用裂解液，產(chǎn)品經(jīng)過多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細(xì)胞裂解物可以直接用于測序和 RT-PCR 等試驗。本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上。

胚胎裂解液用于將卵裂球（blastomere，含 2-8 個細(xì)胞）分離成單個胚胎的溶液，得到的單個細(xì)胞如果用于 DNA 分析（如全基因組擴(kuò)增或 PCR），則可直接用于單細(xì)胞裂解液（DNA 型）裂解；如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），則可直接用于單細(xì)胞裂解液（RNA 型）裂解。本產(chǎn)品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100個細(xì)胞）。
規(guī)格及成分 單細(xì)胞裂解液（RNA 型）成分表：
成 份 編 號 熱封袋包裝
單細(xì)胞裂解液（RNA 型） 130804 1 mL
使用手冊 130804sc 1 份
胚胎裂解液成分表：
成 份 編 號 熱封袋包裝
胚胎裂解液 130806 1 mL
使用手冊 130806sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，=20℃保存，有效期一年。

自備試劑 PBS 溶液

使用方法 如何制備單個細(xì)胞取決于實驗樣品和實驗者所擁有的儀器設(shè)備，此處所列步驟僅針對培養(yǎng)細(xì)胞、實體組織、淋巴細(xì)胞和卵裂球（2-8 細(xì)胞胚胎）等材料，對其

他材料（如干細(xì)胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單細(xì)胞。對已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞（如 FACS 分離細(xì)胞、卵細(xì)胞等），則可以跳過制備過程而直接進(jìn)入單細(xì)胞裂解步驟：

一、用培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶓w組織制備單細(xì)胞：

1. 按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細(xì)胞或組織，將細(xì)胞重懸于自備的液體細(xì)胞培養(yǎng)基中。

2. 按常規(guī)方法對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。

3. 轉(zhuǎn)移 100-4000 個細(xì)胞到新離心管中，400 g 離心 4 分鐘沉淀細(xì)胞，小心棄上清（培養(yǎng)基）。

4. 將細(xì)胞沉淀重懸于 50 uL 自備的 PBS 溶液中，使其終濃度為 2-80 個細(xì)胞/uL。

5. 在干凈的培養(yǎng)皿上點加數(shù)個含 5 uL PBS 溶液的小液滴，加入 5 uL 細(xì)胞懸浮液到一個小液滴中，然后再從一個小液滴中轉(zhuǎn)移 5 uL 到第二個小液滴，如此系列稀釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5 uL 液體中含 1 個細(xì)胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 細(xì)胞胚胎）制備單個細(xì)胞：

6. 在培養(yǎng)皿中點數(shù)個含 5 uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。

7. 顯微鏡下用微量注射液加入一個卵裂球到一個胚胎裂解液小液滴中。

8. 轉(zhuǎn)移幾次到后面的幾個液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。

9. 在后一個液滴中，卵裂球的幾個細(xì)胞將彼此分開成單個細(xì)胞。

10. 取單個細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到數(shù)個含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗滌掉胚胎裂解液。

11. 在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個細(xì)胞的 2.5 uL 樣品并轉(zhuǎn)移到一個 200uL 的 PCR 管中待用。同時設(shè)置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細(xì)胞）。

三、用單細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞

12. 在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品，確認(rèn)含一個細(xì)胞后，將其轉(zhuǎn)移到一個含 2.5 uL 單細(xì)胞裂解液的 PCR 管中。好同時設(shè)置無樣品的陰性對照（2.5uL 樣品中不含細(xì)胞）。

13. 在 2.5 uL 樣品中，顯微鏡下細(xì)胞懸液可直接用于單細(xì)胞裂解反應(yīng)。

14. 裂解后可以放冰上待用，如果長期不用，可以放-80℃保存。

四、單細(xì)胞裂解物的 RT-PCR 擴(kuò)增

15. 細(xì)胞裂解物從-80℃中取出后，放冰上融化待用。

16. 以上步操作得到的細(xì)胞裂解物為模板，按常規(guī)方法進(jìn)行 RT-PCR 反應(yīng)