單細胞裂解液（RNA實驗用）

產(chǎn)品及特點 單細胞裂解液（RNA 專用）是單細胞 RNA 提取專用裂解液，產(chǎn)品經(jīng)過多次 優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的 破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細胞裂解物可以直接用于測序和 RT-PCR 等試驗。 本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上。 胚胎裂解液用于將卵裂球（blastomere，含 2-8 個細胞）分離成單個胚胎的 溶液，得到的單個細胞如果用于 DNA 分析（如全基因組擴增或 PCR），則可直接 用于單細胞裂解液（DNA 型）裂解；如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），則可直 接用于單細胞裂解液（RNA 型）裂解。本產(chǎn)品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100 個細胞）。
規(guī)格及成分 單細胞裂解液（RNA 型）成分表：
成 份 編 號 熱封袋包裝
單細胞裂解液（RNA 型） 130804 1 mL
使用手冊 130804sc 1 份
胚胎裂解液成分表：
成 份 編 號 熱封袋包裝
胚胎裂解液 130806 1 mL
使用手冊 130806sc 1 份

運輸及保存 低溫運輸，=20℃保存，有效期一年。

自備試劑 PBS 溶液

使用方法如何制備單個細胞取決于實驗樣品和實驗者所擁有的儀器設備，此處所列步 驟僅針對培養(yǎng)細胞、實體組織、淋巴細胞和卵裂球（2-8 細胞胚胎）等材料，對其 他材料（如干細胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單 細胞。對已經(jīng)處于單細胞懸浮狀態(tài)的細胞（如 FACS 分離細胞、卵細胞等），則可 以跳過制備過程而直接進入單細胞裂解步驟： 

一、用培養(yǎng)細胞或?qū)嶓w組織制備單

1. 按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細胞或組織，將細胞重懸于自備的液體細胞培養(yǎng)基 中

2. 按常規(guī)方法對細胞進行計數(shù)。

3. 轉(zhuǎn)移 100-4000 個細胞到新離心管中，400 g 離心 4 分鐘沉淀細胞，小心棄 上清（培養(yǎng)基）。

4. 將細胞沉淀重懸于 50 uL 自備的 PBS 溶液中，使其終濃度為 2-80 個細胞 /uL。

5. 在干凈的培養(yǎng)皿上點加數(shù)個含 5 uL PBS 溶液的小液滴，加入 5 uL 細胞懸浮 液到一個小液滴中，然后再從一個小液滴中轉(zhuǎn)移 5 uL 到第二個小液滴， 如此系列稀釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5 uL 液體中含 1 個細胞，放冰 上待用。 

二、用卵裂球（blastomere，2-8 細胞胚胎）制備單個細胞：

6. 在培養(yǎng)皿中點數(shù)個含 5 uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。

7. 顯微鏡下用微量注射液加入一個卵裂球到一個胚胎裂解液小液滴中。

8. 轉(zhuǎn)移幾次到后面的幾個液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。

9. 在后一個液滴中，卵裂球的幾個細胞將彼此分開成單個細胞。

10. 取單個細胞，轉(zhuǎn)移到數(shù)個含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗滌掉胚胎裂解液。

11. 在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個細胞的 2.5 uL 樣品并轉(zhuǎn)移到一個 200 uL 的 PCR 管中待用。同時設置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細胞）。

三、用單細胞裂解液裂解細

12. 在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品，確認含一個細胞后，將其轉(zhuǎn)移到一 個含 2.5 uL 單細胞裂解液的 PCR 管中。好同時設置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細胞）。

13. 在 2.5 uL 樣品中，顯微鏡下細胞懸液可直接用于單細胞裂解反應。

14. 裂解后可以放冰上待用，如果長期不用，可以放-80℃保存。

四、單細胞裂解物的 RT-PCR 擴增 

15. 細胞裂解物從-80℃中取出后，放冰上融化待用。

16. 以上步操作得到的細胞裂解物為模板，按常規(guī)方法進行 RT-PCR 反應。