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主營產(chǎn)品: 生化試劑, 標(biāo)準(zhǔn)品, ELISA試劑盒, 化學(xué)試劑, 分析試劑
單細(xì)胞裂解液(DNA實(shí)驗(yàn)用)/KLANG
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上海市閔行區(qū)
主營產(chǎn)品
單細(xì)胞裂解液(DNA實(shí)驗(yàn)用)
產(chǎn)品及特點(diǎn)單細(xì)胞裂解液(DNA 專用)是單細(xì)胞 DNA 提取專用裂解液,產(chǎn)品經(jīng)過多次優(yōu)化,含有多種去污劑、變性劑和鹽,可有效抑制核酸酶在裂解過程中對(duì)核酸的破壞,維持核酸的穩(wěn)定性。單細(xì)胞裂解物可以直接用于測序和RT-PCR 等試驗(yàn)。本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 熱封袋包裝
單細(xì)胞裂解液(DNA 型) 130803 1 mL
使用手冊 130803sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,4℃保存,有效期一年。
自備試劑 PBS 溶液
使用方法 如何制備單個(gè)細(xì)胞取決于實(shí)驗(yàn)樣品和實(shí)驗(yàn)者所擁有的儀器設(shè)備,此處所列步驟僅針對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞、實(shí)體組織、淋巴細(xì)胞和卵裂球(2-8 細(xì)胞胚胎)等材料,對(duì)其他材料(如干細(xì)胞克隆、胚囊、胚胎組織等),用戶需自行選用合適的方法制備單細(xì)胞。對(duì)已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞(如 FACS 分離細(xì)胞、卵細(xì)胞等),則可以跳過制備過程而直接進(jìn)入單細(xì)胞裂解步驟:
一、用培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶓w組織制備單細(xì)胞:
1. 按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細(xì)胞或組織,將細(xì)胞重懸于自備的液體細(xì)胞培養(yǎng)基中。
2. 按常規(guī)方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
3. 轉(zhuǎn)移 100-4000 個(gè)細(xì)胞到新離心管中,400 g 離心 4 分鐘沉淀細(xì)胞,小心棄上清(培養(yǎng)基)。
4. 將細(xì)胞沉淀重懸于 50 uL 自備的 PBS 溶液中,使其終濃度為 2-80 個(gè)細(xì)胞/uL。
5. 在干凈的培養(yǎng)皿上點(diǎn)加數(shù)個(gè)含 5 uL PBS 溶液的小液滴,加入 5 uL 細(xì)胞懸浮液到一個(gè)小液滴中,然后再從一個(gè)小液滴中轉(zhuǎn)移 5 uL 到第
二個(gè)小液滴,如此系列稀釋樣品數(shù)次,使得其濃度接近每 2.5 uL 液體中含 1 個(gè)細(xì)胞,放冰上待用。
二、用卵裂球(blastomere,2-8 細(xì)胞胚胎)制備單個(gè)細(xì)胞:
6. 在培養(yǎng)皿中點(diǎn)數(shù)個(gè)含 5 uL 胚胎裂解液的小液滴。
7. 顯微鏡下用微量注射液加入一個(gè)卵裂球到一個(gè)胚胎裂解液小液滴中。
8. 轉(zhuǎn)移幾次到后面的幾個(gè)液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。
9. 在后一個(gè)液滴中,卵裂球的幾個(gè)細(xì)胞將彼此分開成單個(gè)細(xì)胞。
10. 取單個(gè)細(xì)胞,轉(zhuǎn)移到數(shù)個(gè)含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗滌掉胚胎裂液。
11. 在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個(gè)細(xì)胞的 2.5 uL 樣品并轉(zhuǎn)移到一個(gè)200 uL 的 PCR 管中待用。同時(shí)設(shè)置無樣品的陰性對(duì)照(2.5 uL 樣品
中不含細(xì)胞)。
三、用單細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞
12. 在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品,確認(rèn)含一個(gè)細(xì)胞后,將其轉(zhuǎn)移到一個(gè)含 2.5 uL 單細(xì)胞裂解液的 PCR 管中。好同時(shí)設(shè)置無樣品陰性對(duì)照(2.5 uL 樣品中不含細(xì)胞)。
13. 在 2.5 uL 樣品中,顯微鏡下細(xì)胞懸液可直接用于單細(xì)胞裂解反應(yīng)。
14. 裂解后可以放冰上待用,如果長期不用,可以放-80℃保存。四、單細(xì)胞裂解物的 PCR 擴(kuò)增
15. 細(xì)胞裂解物從-80℃中取出后,65℃保溫 10 分鐘,取出后放冰上待用。
16. 以一半或全部上步操作得到的細(xì)胞裂解物為模板,按常規(guī)方法進(jìn)行 PC反應(yīng)。
采購數(shù)量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
驗(yàn)證碼不正確