可視化UNG-LAMP試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒是本公司可視化 LAMP 試劑盒的升級(jí)版，它有下列特點(diǎn)：

1. 防污染,在 2×可視化 LAMP MagicMix 中整合了 dUTP-UNG 防污染系統(tǒng)，解決了 LAMP 擴(kuò)增非常容易污染的這個(gè)棘手問(wèn)題。

2. 可視化，整合了本公司的 A 型 LAMP 可見(jiàn)光染料，不需要任何儀器即可肉眼判斷是否有擴(kuò)增。

3. 使用改良的 Bst DNA 聚合酶，使本產(chǎn)品既可用 DNA 為模板于 LAMP 擴(kuò)增，也可用 RNA 模板進(jìn)行 UT-LAMP 擴(kuò)增。DNA 聚合酶只有在 40℃以上時(shí)擴(kuò)增才啟動(dòng)，反應(yīng)特異性更強(qiáng)。

4. 擴(kuò)增效率更高，擴(kuò)增效率可達(dá)到上億倍，比 PCR 靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)，可檢測(cè)到單拷貝的 DNA 分子。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的可視化 UNG-LAMP 和 UNG-RT-LAMP擴(kuò)增。

6. 本試劑只能用于科研，不能用于臨床。

規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 塑料袋包裝
2×可視化 UNG-LAMP MagicMix 180703a 500 uL
使用手冊(cè) 180703sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 LAMP 模板、RT-LAMP 模板及 LAMP 引物 

使用方法 

1. 配制自備的5×LAMP引物混合液：先加超純水（不要用TE）將各引物干粉稀釋到下表所列母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列加入量加入各種引物母液和自備超純水，后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果不使用Loop引物，其體積由水填充如果需要配制的5×LAMP引物混合液體積大于或小于1mL，則各成分的用量請(qǐng)按比例調(diào)整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名稱(chēng) 母液濃度 加入量 在混合液中終于濃度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80

自備超純水 780 uL

2. 在新的反應(yīng)管中設(shè)置UNG-LAMP或UNG-RT-LAMP反應(yīng)：成份 樣品管 陰性對(duì)照 1 陰性對(duì)照 2

2×可視化 UNG-LAMP Mix 10 uL 10 uL 10 uL

自備 5×LAMP 引物混合液 4 uL 4 uL -

自備模板 DNA 或 RNA 1-100ng - 1-100ng

補(bǔ)超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

3. 混勻，此時(shí)反應(yīng)液呈現(xiàn)非常淺的綠色，由于是否有反應(yīng)是跟陰性對(duì)照和反應(yīng)前對(duì)比，所以一定要設(shè)置陰性對(duì)照，并且反應(yīng)前要手機(jī)照相留存以供反應(yīng)后比對(duì)。

4. 置于25℃5分鐘（讓UNG滅活可能的LAMP的污染），然后放63℃擴(kuò)增60-120分鐘（如果不使用Loop引物，則好保溫2小時(shí)）。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫，沒(méi)有熱蓋，必須在孔中加水以

填充孔和管子間的空隙，并且在管中加50uL石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，影響反應(yīng)效率）。

5. 80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶和UNG酶。

6. 如果有陽(yáng)性擴(kuò)增，則反應(yīng)液將變成綠色，如果沒(méi)有陽(yáng)性擴(kuò)增，反應(yīng)液將還是淺綠色。標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)結(jié)果如下圖（左邊1個(gè)為陰性，右邊2個(gè)為陽(yáng)性）：

7. 如果需要電泳確認(rèn)，則取擴(kuò)增產(chǎn)物5 uL直接在2%的瓊脂糖凝膠電泳（不需要再加上樣液），可見(jiàn)LAMP特征性電泳圖譜。一般不簡(jiǎn)易在開(kāi)蓋，這正式產(chǎn)生污染的原因。