可視化LAMP試劑盒

本試劑盒是本公司通用型 LAMP 試劑盒的升級版，它有下列特點：

1. 將可視化 LAMP 染料和 Bst DNA 聚合酶整合到 2×LAMP MagicMix 中，減少了加樣操作，能降低操作誤差。

2. 變色式可視化肉眼檢測，不需要任何儀器即可肉眼判斷是否有擴增。

3. 使用改良的溫熱啟動 Bst DNA 聚合酶，該酶只有在 40℃以上時才有活性，反應特異性更強。

4. 改良的酶既可用于 DNA 為模板的 LAMP 擴增，也可用 RNA 模板的RT-LAMP 擴增。

5. 高擴增效率更高，比 PCR 靈敏一個數量級，可檢測到單拷貝的 DNA 分子。

6. 本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴增，只可用于科研。

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，免 DNA 提取試劑可以常溫保存。有效期一年。本試劑盒中的 2×可視化 LAMP MagicMix 由于含有 Bst DNA 聚合酶，故不能反復凍融超過 10 次。如果需要反復凍融 10 次以上，建議收到貨后立即分裝，一次用其中一管，減少凍融次數。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝
2×可視化 LAMP MagicMix 180601a 500 uL（綠蓋）
LAMP 陽性對照模板-引物混合物 130923a 45 uL（黃蓋）
超純水 100935 1 mL（藍蓋）
使用手冊 180601sc 1 份
免費贈送免 DNA 提取試劑盒試用裝，足夠處理 30 個樣品。
成 份 編 號 十孔盒包裝
免 DNA 提取溶液 A 成分一 130985a1 30 uL（白蓋）
免 DNA 提取溶液 A 成分二 130985a2 60 uL（本色蓋）
免 DNA 提取溶液 B 130985b 300 uL（紅蓋）

自備試劑 LAMP 模板、RT-LAMP 模板及 LAMP 引物

使用方法

 1. 制備DNA或RNA樣品：用合適的DNA或RNA提取試劑盒提取樣品DNA或RNA。本試劑盒含免DNA提取試劑盒試用裝（足夠處理30個樣品）。具體操作見使用方法后的

引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液體積大于或小于1mL，

則各成分的用量請按比例調整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名稱 母液濃度 加入量 在混合液中濃度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超純水 780 uL

3. 在新的反應管中設置LAMP反應（PC為陽性對照、NC1為不加模板陰性對照、NC2為不加引物陰性對照。注意：為便于可視化顏色比較，每次實驗必須設置至少一個陰性對照。本試劑盒只提供LAMP的陽性對照模板，不提供RT-LAMP的陽性對照模板）：

成份 樣品管 PC NC1 NC2

2×可視化 LAMP MagicMix 10 uL 10 uL 10 uL 10 uL

自備 5×LAMP 引物混合液 4 uL - 4 uL -

自備模板 DNA 或 RNA 1-100ng - - -

LAMP 陽性對照模板-引物混合物 - 4.5 uL - -

補超純水到 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

4. 混勻，此時反應液呈現非常淡的藍色。置于60-65℃保溫60-120分鐘（具體最佳溫度跟用戶設計的LAMP引物序列相關，一般選擇63℃。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫，沒有熱蓋，建議覆蓋30uL石蠟油，否則保溫期間反應體系的水分會蒸發(fā)，影響反應效率）。

5. 80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶。

6. 觀察實驗結果。將反應管放置在白色背景前觀察，觀察反應液顏色。陽性對照（PC）將呈現淡藍色，無模板和無引物陰性對照將呈現無色或非常淺的藍色，樣品管的顏色如果接近陽性對照則說明有擴增，如果接近陰性對照則說明無擴增。標準的反應結果如下圖（左邊為陰性，右邊為陽性）：

7. 如果結果不明確，則需要電泳確認：取擴增產物5 uL跟上樣液（loadingbuffer）混合后上樣，出現LAMP特征性電泳圖譜則表示有擴增。由于電泳需要打開反應管的蓋子，非常容易污染實驗環(huán)境，所以LAMP電泳區(qū)域必須跟反應設置區(qū)域分開。

8. 結果分析：如果陽性對照能夠擴增而陰性對照不能擴出，則實驗有效。如果陽性對照沒有擴增出條帶，則試劑盒的問題，請跟廠家聯(lián)系。如果陰性對照出現擴增條帶，則說明LAMP樣品或試劑被上次擴增產物污染，需要注意操作的規(guī)范性，最好重新設計針對另一區(qū)域的新引物。

附錄：免DNA提取操作步驟

1. 配制免 DNA 提取溶液 A 工作液 1mL（足夠 10 個樣品，如果待測樣品數量為其他數字，各成份用量需要相應調整）：在一干凈塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超純水，充分混合均勻即得1mL 溶液 A 工作液。處理一個樣品需要 100uL 溶液 A 工作液。沒用完的溶液 A 工作液可室溫放置，但最好在一周內用完，不要長期放置。

2. 對檢測基因組 DNA，按參考下取樣到一干凈的塑料離心管中（對表中未列

出的植物，用戶需要自己摸索最佳用量）：

樣品種類 取用量

動物組織 1-5 mg

鼠尾 2mm 長

血液樣品 不超過 20 uL

植物葉片 1-5 mg，多酚多醌植物不要超過 0.5mg

植物種子（去皮） 1-5 mg

細菌或酵母培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物的沉淀

3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液，確保樣品被溶液淹埋。95℃保溫 10 分鐘。

4. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得細胞裂解液，放冰上待用。每次 LAMP 擴增取 1-2uL 細胞裂解液當模板即可。如果細胞裂解液暫時不用，可以放-20℃長期保存。